İNSAN PERİFERİK KANINDAN ÇOK KÜÇÜK EMBRİYONİK (VSEL) KÖK HÜCRELERİN ELDE EDİLMESİ VE TANIMLANMASI
Yıl: 2019 Cilt: 82 Sayı: 2 Sayfa Aralığı: 96 - 106 Metin Dili: Türkçe DOI: 10.26650/IUITFD.2018.0001 İndeks Tarihi: 28-05-2020
İNSAN PERİFERİK KANINDAN ÇOK KÜÇÜK EMBRİYONİK (VSEL) KÖK HÜCRELERİN ELDE EDİLMESİ VE TANIMLANMASI
Öz: Amaç: Kök hücre (KH) nakli malin kan hastalıkları, kemik iliği yetmezlikleri ve doğumsal kan hastalıklarının tedavisinde kullanılanyöntemdir. Bu amaçla, periferik kan projenitör hücreleri (PKPH)oldukça fazla kullanılmaktadır. Son yıllarda insan embriyonik kökhücrelerinin sahip olduğu pluripotent özelliği bulunan yeni KHtürü tanımlanmıştır. Çok küçük embriyonik benzeri (VSEL) kökhücreler olarak adlandırılan bu hücrelerin, yetişkin bireyde periferik kanda (PK) bulunduğu düşünülmektedir. Bu çalışmada VSELkök hücrelerinin periferik kan kaynağı kullanarak elde edilmesi vetanımlanması amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: Donörlerden alınan materyallerden lizis vefikol gradient yöntemleri kullanılarak elde edilen mononükleerve eritrosit katmanınlarından, VSEL hücreleri izole edilmiştir. Flovsitometri ve immünfloresan boyama ile NANOG, OCT4, SSEA-4ve CXCR-4 embriyonal kök hücre belirteçlerinin varlığı incelenmiştir. Western blot yöntemiyle ise, NANOG ve OCT4 proteinlerinin varlığı araştırılmıştır.Bulgular: Flov sitometri sonuçlarına göre debris katmanında,VSEL belirteci taşıyan hücre sayısı CD45- popülasyonuna göredaha yüksek bulunmuştur. Elde edilen western ve immünfloresansonuçlarına göre yüksek miktarda OCT4 ve NANOG ekspresyonu görülmüştür. Aynı zamanda bu proteinlerin hücre içinde hemsitoplazmada hem de çekirdekte bulunduğu gösterilmiştir.Sonuç: Pluripotent kök hücre belirteci olarak bilinen bu proteinlerin yetişkin periferik kanında yüksek miktarda ekspresyonunun,farklılaşmış dokularda nasıl görev yaptığı sorusunu akıllara getirmektedir. Bu bulgular; periferik kanda pluripotent belirteçlertaşıyan yeni bir kök hücre populasyonu bulunduğu tezini güçlendirmekte ve bu konuda yapılacak ileriye dönük klinik çalışmalariçinde temel oluşturmaktadır.
Anahtar Kelime: Konular:
CHARACTERIZATION AND ISOLATION OF VERY SMALL EMBRYONIC-LIKE (VSEL) STEM CELLS OBTAINED FROM HUMAN PERIPHERAL BLOOD
Öz: Objective: Stem cell transplantation is considered to be one of the available treatments for malign or hereditary blood diseases and bone marrow failure. Peripheral blood progenitor cells (PBPC) are widely used for this technique. Recently a new type of stem cell with a pluripotent potential has been identified. These cells, called very small embryonic-like (VSEL) stem cells, are thought to be found in peripheral blood (PB) in adult individuals. The aim of this study was to obtain and identify VSEL stem cells using a peripheral blood source. Material and Method: VSEL cells were isolated from mononuclear and erythrocyte layers obtained by using lysis and ficoll gradient methods from the materials taken from donors. The presence of NANOG, OCT4, SSEA-4 and CXCR-4 embryonal stem cell markers by flow cytometry and immunofluorescence staining was investigated. The presence of NANOG and OCT4 proteins was investigated using the Western blot method. Results: According to the flow cytometry results, the number of cells carrying the VSEL marker was higher in the debris layer than in the CD45-population. Western and immunofluorescence results showed high levels of OCT4 and NANOG expression. It was also determined that these proteins are present in both the cytoplasm and the nucleus. Conclusions: High expression of these proteins, known as pluripotent stem cell markers, in adult peripheral blood brings to mind the question of how they work in differentiated tissues. These findings strengthen the thesis of a new stem cell population that have pluripotent markers in peripheral blood and provide the basis for future clinical studies about this point
Anahtar Kelime: Konular:
Belge Türü: Makale Makale Türü: Araştırma Makalesi Erişim Türü: Erişime Açık
- 1. Kucia M, Reca R, Campbell FR, Zuba-Surma E, Majka M, Ratajcsak J. et al, A population of very embryonic-like (VSEL) CXCR4+ SSEA-1+ Oct-4+ stem cells identified in adult bone marrow. Leukemia 2006;20:857-69. [CrossRef]
- 2. Zuba-Surma EK, Kucia M, Ratajczak J, Patajczak MZ. “Small stem cells” in adult tissues: Very small embryonic-like stem cells (VSELs) Stand up. Cytometry 2009;75(1):4-13. [CrossRef]
- 3. Kucia M, Wysoczynski M, Wu W, Zuba-Surma EK, Ratajczak J, Ratajczak MZ. Evidence that very small embryonic-like stem cells are mobilized into peripheral blood. Stem Cells 2008;26:2083-92. [CrossRef]
- 4. Loos H, Blok-Schut B, Van Doorn R, Hoksbergen R, Riviere AB, Meerhof L. A method for the recognition and separation of human blood monocytes on density gradient. Blood 1976;48:731-42.
- 5. Bhartiya D, Shaikh A, Nagvenkar P, Kasiviswananthan S, Pethe Prasad, Pawani H, et al. Very small embryoniclike stem cells with maximum regenerative potential get discarded during cord blood banking and bone marrow processing for autologous stem cell therapy. Stem Cells Dev 2012;21(1):1-6. [CrossRef]
- 6. Chang Y, Tien K, Wen C, Hsieh T, Hwang S. Recovery of CD45(-)/Lin(-)/SSEA-4(+) very small embryonic-like stem cells by cord blood bank standard operating procedures. Cytotherapy 2014;16(4):560-5. [CrossRef]
- 7. Sovalat H, Scrofani M, Eidenschenk A, Pasquet S, Rimelen V, Henon P. Identification and isolation from either adult human bone marrow or G-CSF-mobilized peripheral blood of CD34+/CD133+/CXCR4+/ Lin-CD45- cells, featuring morphological, molecular, and phenotypic characteristics of very small embryonic-like (VSEL) stem cells. Exp Hematol 2011;39:495-505. [CrossRef]
- 8. Ratajczak MZ, Zuba-Surma E, Wojakowski W, Kucia M, Ratajczak J. Bone marrow – Home of versatile stem cells. Transfus Med Hemother 2008;35:248-59. [CrossRef] 9. Kucia M, Ratajczak J, Ratajczak MZ. Are bona marrow stem cells plastic or heterogenous – That is the question. Exp Hematol 2005;33:613-23. [CrossRef]
- 10. Ratajczak MZ, Zuba-Surma E, Wojaskowski W, Suszynzka M, Liu R, Ratajczak J, et al. Very small embryonic-like stem cells (VSELs) represent a real challenge in stem cell biology: recent pros and cons in the midst of a lively debate. Leukemia 2014;28:473-84. [CrossRef]
- 11. Parker GC. Very small embryonic-like stem cells: A scientific debate? Stem Cells Dev 2014;23(7):687-8. [CrossRef] 12. Kassmer SH, Krause DS. Very small embryonic-like stem cells: Biology and function of these potential endogenous pluripotent stem cells in adult tissues. Mol Reprod Dev 2013;80:677-90. [CrossRef]
- 13. Heider A, Danova-Alt R, Egger D, Cross M, Alt R. Murine and human very small embryonic-like cells: A perspective. Cytometry 2012;83A:72-5. [CrossRef]
- 14. Kucia M, Halasa M, Wysoczynski M, Baskiewicz-Masiuk M, Moldenhawer S, Zuba-Surma E. et al. Morphological and molecular characterization of novel population of CXCR4+/ SSEA-4+/Oct-4+ very small embryonic-like cells purified from human cord blood – preliminary report. Leukemia 2007;21;297-303. [CrossRef]
- 15. Zangrossi S, Marabese M, Broggini M, Giordano R, D’Erasmo M, Montelatici E. et al. Oct-4 expression in adult human differentiated cells challenges its role as a pure stem cell marker. Stem Cells 2007;25:1675-80. [CrossRef]
- 16. Lee J, Kim HK, Rho J, Han Y, Kim J. Human Oct4 isoforms differ in their abilitiy to confer self-renewal. J Biol Chem 2006;281:33554-65. [CrossRef]
- 17. Caufmann G, Liebaers I, Steirteghem AV, Velde HVD. POU5F1 isoforms show different expression patterns in human embryonic stem cells and preimplantation embriyos. Stem Cells 2006;24;2685-91. [CrossRef]
- 18. Liedtke S, Enczmann J, Walclawczyk S, Wernet P, Kögler G. Oct4 and its pseudogenes confuse stem cell research. Cell Stem Cell 2007;1:364-6. [CrossRef]
- 19. Tai M, Chang C, Olson LK, Trosko JE. Oct4 expression in adult human stem cells: evidence in support of the stem cell theory of carcinogenesis. Carcinogenesis 2005;26(2):495- 502. [CrossRef]
- 20. Atlasi Y, Mowla SJ, Ziaee SAM, Gokhale PJ, Andrews PW. OCT4 spliced variants are differentially expressed in human pluripotent and nonpluripotent cells. Stem Cells 2008; 26:3068-74. [CrossRef]
- 21. Redshaw Z, Strain A. Human hemotopoietic stem cells express Oct4 pseudogenes and lack the ability to initiate Oct4 promoter-driven gene expression. J Negat Results Biomed 2010;9(1):2. [CrossRef]
- 22. Ambady S, Malcuit C, Kashpur O, Kole D, Holmes WF, Hedblom E. et al. Int Dev Biol 2010;54:1743-54. [CrossRef] 23. Booth HAF, Holland PWH. Eleven daughters of NANOG. Genomics 2004;84:229-38. [CrossRef]
- 24. Hatano S, Tada M, Kimura H, Yamaguchi S, Kono T, Nakano T. et al. Pluripotential competence of cells associated with Nanog activity. Mec Develop 2005;22:67-79. [CrossRef]
- 25. Levasseur DN, Das S, Jena S. Alternative splicing produces nanog protein variants with different capacities for selfrenewal and pluripotency in embriyonic stem cells. J Biol Chem 2011;286:42690-703. [CrossRef]
- 26. Gu T, Liu S, Zheng P. Cytoplasmic NANOG- positive stromal cells promote human cervical cancer progression. Am J Pathol 2012;181(2):652-60. [CrossRef]
- 27. Ezeh UI, Turek PJ, Reijo RA, Clark AT. Human embriyonic stem cell genes OCT4, NANOG, STELLAR, and GDF3 are expressed in both seminoma and breast carcinoma. Cancer 2005;104:2255-65. [CrossRef]
- 28. Page R, Ambady S, Holmes WF, Vilner L, Kole D, Kashpur O, et al. İnduction of stem cell gene expression in adult human fibroblasts without transgenes. Cloning stem cells 2009;11(3):417-25. [CrossRef]
- 29. Alvarez A, Hossain M, Dantuma E, Merchant S, Sugaya K. NANOG overexpression allows human mesenchymal stem cells to differentiate into neural cells. Neurosci Med 2010;1:1-13. [CrossRef]
- 30. Eberle I, Pless B, Braun M, Dingermann T, Marschalek R. Transcriptional properties of human NANOG1 and NANOG2 in acute leukemic cells. Nucleic Acids Res 2010; 38(16):5384-95. [CrossRef]
| APA | ERDEM KURUCA S, Çelik D, Yanikkaya Demirel G, Özerkan D (2019). İNSAN PERİFERİK KANINDAN ÇOK KÜÇÜK EMBRİYONİK (VSEL) KÖK HÜCRELERİN ELDE EDİLMESİ VE TANIMLANMASI. , 96 - 106. 10.26650/IUITFD.2018.0001 |
| Chicago | ERDEM KURUCA Serap,Çelik Dolay Damla,Yanikkaya Demirel Gulderen,Özerkan Dilşad İNSAN PERİFERİK KANINDAN ÇOK KÜÇÜK EMBRİYONİK (VSEL) KÖK HÜCRELERİN ELDE EDİLMESİ VE TANIMLANMASI. (2019): 96 - 106. 10.26650/IUITFD.2018.0001 |
| MLA | ERDEM KURUCA Serap,Çelik Dolay Damla,Yanikkaya Demirel Gulderen,Özerkan Dilşad İNSAN PERİFERİK KANINDAN ÇOK KÜÇÜK EMBRİYONİK (VSEL) KÖK HÜCRELERİN ELDE EDİLMESİ VE TANIMLANMASI. , 2019, ss.96 - 106. 10.26650/IUITFD.2018.0001 |
| AMA | ERDEM KURUCA S,Çelik D,Yanikkaya Demirel G,Özerkan D İNSAN PERİFERİK KANINDAN ÇOK KÜÇÜK EMBRİYONİK (VSEL) KÖK HÜCRELERİN ELDE EDİLMESİ VE TANIMLANMASI. . 2019; 96 - 106. 10.26650/IUITFD.2018.0001 |
| Vancouver | ERDEM KURUCA S,Çelik D,Yanikkaya Demirel G,Özerkan D İNSAN PERİFERİK KANINDAN ÇOK KÜÇÜK EMBRİYONİK (VSEL) KÖK HÜCRELERİN ELDE EDİLMESİ VE TANIMLANMASI. . 2019; 96 - 106. 10.26650/IUITFD.2018.0001 |
| IEEE | ERDEM KURUCA S,Çelik D,Yanikkaya Demirel G,Özerkan D "İNSAN PERİFERİK KANINDAN ÇOK KÜÇÜK EMBRİYONİK (VSEL) KÖK HÜCRELERİN ELDE EDİLMESİ VE TANIMLANMASI." , ss.96 - 106, 2019. 10.26650/IUITFD.2018.0001 |
| ISNAD | ERDEM KURUCA, Serap vd. "İNSAN PERİFERİK KANINDAN ÇOK KÜÇÜK EMBRİYONİK (VSEL) KÖK HÜCRELERİN ELDE EDİLMESİ VE TANIMLANMASI". (2019), 96-106. https://doi.org/10.26650/IUITFD.2018.0001 |
| APA | ERDEM KURUCA S, Çelik D, Yanikkaya Demirel G, Özerkan D (2019). İNSAN PERİFERİK KANINDAN ÇOK KÜÇÜK EMBRİYONİK (VSEL) KÖK HÜCRELERİN ELDE EDİLMESİ VE TANIMLANMASI. İstanbul Tıp Fakültesi Dergisi, 82(2), 96 - 106. 10.26650/IUITFD.2018.0001 |
| Chicago | ERDEM KURUCA Serap,Çelik Dolay Damla,Yanikkaya Demirel Gulderen,Özerkan Dilşad İNSAN PERİFERİK KANINDAN ÇOK KÜÇÜK EMBRİYONİK (VSEL) KÖK HÜCRELERİN ELDE EDİLMESİ VE TANIMLANMASI. İstanbul Tıp Fakültesi Dergisi 82, no.2 (2019): 96 - 106. 10.26650/IUITFD.2018.0001 |
| MLA | ERDEM KURUCA Serap,Çelik Dolay Damla,Yanikkaya Demirel Gulderen,Özerkan Dilşad İNSAN PERİFERİK KANINDAN ÇOK KÜÇÜK EMBRİYONİK (VSEL) KÖK HÜCRELERİN ELDE EDİLMESİ VE TANIMLANMASI. İstanbul Tıp Fakültesi Dergisi, vol.82, no.2, 2019, ss.96 - 106. 10.26650/IUITFD.2018.0001 |
| AMA | ERDEM KURUCA S,Çelik D,Yanikkaya Demirel G,Özerkan D İNSAN PERİFERİK KANINDAN ÇOK KÜÇÜK EMBRİYONİK (VSEL) KÖK HÜCRELERİN ELDE EDİLMESİ VE TANIMLANMASI. İstanbul Tıp Fakültesi Dergisi. 2019; 82(2): 96 - 106. 10.26650/IUITFD.2018.0001 |
| Vancouver | ERDEM KURUCA S,Çelik D,Yanikkaya Demirel G,Özerkan D İNSAN PERİFERİK KANINDAN ÇOK KÜÇÜK EMBRİYONİK (VSEL) KÖK HÜCRELERİN ELDE EDİLMESİ VE TANIMLANMASI. İstanbul Tıp Fakültesi Dergisi. 2019; 82(2): 96 - 106. 10.26650/IUITFD.2018.0001 |
| IEEE | ERDEM KURUCA S,Çelik D,Yanikkaya Demirel G,Özerkan D "İNSAN PERİFERİK KANINDAN ÇOK KÜÇÜK EMBRİYONİK (VSEL) KÖK HÜCRELERİN ELDE EDİLMESİ VE TANIMLANMASI." İstanbul Tıp Fakültesi Dergisi, 82, ss.96 - 106, 2019. 10.26650/IUITFD.2018.0001 |
| ISNAD | ERDEM KURUCA, Serap vd. "İNSAN PERİFERİK KANINDAN ÇOK KÜÇÜK EMBRİYONİK (VSEL) KÖK HÜCRELERİN ELDE EDİLMESİ VE TANIMLANMASI". İstanbul Tıp Fakültesi Dergisi 82/2 (2019), 96-106. https://doi.org/10.26650/IUITFD.2018.0001 |
