Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması

ÖZBAL, Yusuf; YAĞMUR, Gülhan; gökahmetoğlu, selma

Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması

Gülhan YAĞMUR, (Kayseri Kadın Doğum ve Çocuk Hastalıkları Hastanesi, Kayseri, Türkiye)

Yusuf ÖZBAL, (Erciyes Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Kayseri, Türkiye)

Selma GÖKAHMETOĞLU (Erciyes Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Kayseri, Türkiye)

Mikrobiyoloji Bülteni

75 0

Yıl: 2010 Cilt: 44 Sayı: 1 Sayfa Aralığı: 47 - 56 Metin Dili: Türkçe İndeks Tarihi: 29-07-2022

Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması

Öz:

Herpes simpleks virus (HSV) enfeksiyonları tüm dünyada yaygın bir klinik problemdir. Özellikle im-mün sistemi baskılanmış hastalarda, enfeksiyon ciddi ve progresif seyretmekte ve önemli morbidite ve mortaliteye yol açmaktadır. Bu nedenle HSV enfeksiyonlarının hızlı ve güvenilir laboratuvar tanısı erken tedavi açısından önemlidir. Bu çalışmada, HSV enfeksiyonu ön tanılı hastalardan alınan klinik örneklerde HSV tip 1 ve tip 2 varlığı, hücre kültürü, "in house" polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ve direkt floresan antikor (DFA) yöntemleri ile araştırılmıştır. Çalışmaya, Mart 2006-Haziran 2007 tarihleri arasında Erciyes Üniversitesi Cevher Nesibe Hastaneleri Kliniklerinde takip edilen meningoensefalit ön tanılı 38 hastadan alınan beyin omurilik sıvısı (BOS) örnekleri ile herpes enfeksiyonu şüpheli 27 poliklinik hastasından (13 herpes labialis, 5 keratokonjunktivit, 4 gingivostomatit, 3 ekzama herpetikum, 1 herpetik dolama, 1 genital lezyon) alınan veziküler/konjunktival/genital sürüntü örnekleri dahil edilmiştir. Çalışmaya alınan toplam 65 hastanın 20'si çocuk, 45'i yetişkin olup, yaşlan 1-68 yıl arasında değişmektedir. HSV varlığının araştırılması için sürüntü örneklerine her üç yöntem de uygulanırken, BOS örnekleri için DFA yöntemi önerilmediğinden sadece hücre kültürü ve PCR yöntemleri kullanılmıştır. Sürüntü örneklerinin %48.1 (13/27)'inde DFA ile HSV antijeni pozitif bulunmuş (12'sinde HSV-1, herpetik dolamalı hasta örneğinde HSV-2); %51.8 (14/27)'inde Hep-2 hücre kültürlerinde HSV'ye özgü sitopatik etki saptanmış ve %66.6 (18/27)'sında PCR ile HSV-DNA varlığı belirlenmiştir. BOS örneklerinin ise %7.8 (3/38)'inde hücre kültürü ile ve %47.4 (18/38)'ünde PCR ile HSV pozitifliği saptanmıştır. Sitopatik etki izlenen hücre kültürlerin-deki virus üremesi, HSV-1 ve HSV-2'ye özgül floresanla işaretli monoklonal antikorların kullanıldığı DFA yöntemi (Monofluo, Bio-Rad Laboratories, ABD) ile de doğrulanmıştır. Yöntemler arasındaki uyum Kap-pa analizi ile değerlendirilmiş ve gerek sürüntü örnekleri için hücre kültürü ile DFA ve PCR arasındaki uyum (k= 0.7), gerekse BOS örnekleri için hücre kültürü ile PCR arasındaki uyum (k= 0.6) orta düzeyde bulunmuştur. Sonuç olarak HSV enfeksiyonlarının tanısında, sürüntü örneklerinde hızlı ve pratik olması nedeniyle DFA yönteminin (ve mümkünse sırasıyla PCR ve hücre kültürü yöntemlerinin), BOS örneklerinde ise hızlı ve duyarlı olması nedeniyle PCR yönteminin tercih edilmesi gerektiği düşünülmüştür.

Anahtar Kelime:

Konular: Mikrobiyoloji Hematoloji Biyoteknoloji ve Uygulamalı Mikrobiyoloji Viroloji Enfeksiyon Hastalıkları

Investigation of herpes simplex virüs (HSV) by three different methods in the clinical specimens of patients with suspected HSV infections

Öz:

Herpes simplex virus (HSV) infections are a common clinical problem worldwide. HSV infections have a severe and rapidly progressive course especially in immunocompromised patients, leading to significant morbidity and mortality. Therefore, rapid and reliable laboratory diagnosis of HSV infections is of crucial importance for the initiation of early antiviral therapy. In this study the aim was to investigate the presence of HSV type 1 and type 2 in clinical specimens by cell culture, in-house polymerase chain reaction (PCR) and direct fluorescein antibody (DFA) methods. The study was conducted at Erciyes University Gevher Nesibe Hospitals between March 2006 and June 2007. A total of 65 clinical specimens, 38 of them being cerebrospinal fluid (CSF) samples obtained from meningoencephalitis suspected cases and 27 being vesicular/conjunctival/genital swabs obtained from patients with different clinical presentations (13 herpes labialis, 5 keratoconjunctivitis, 4 gingivostomatitis, 3 eczama herpeticum, 1 herpetic whitlow, 1 genital ulcer). The age range of the 65 patients varied between 1-68 years, 20 being children. All the samples except CSF were investigated by 3 of the test methods, however, CSF samples were tested only by cell culture and PCR since DFA is not recommended. HSV was found positive in 48.1% (13/27) of the 27 swab specimens by DFA, in 66.6% (18/27) by PCR and in 51.8% (14/27) cytopathic effect consistent with HSV was observed. HSV positivity was detected in 7.8% (3/38) of the 38 CSF specimens by cell culture and in 47.4% (18/38) by in-house PCR. Viral growth in cell cultures showing cytopathic effect were further confirmed by DFA method using HSV-1 and HSV-2 specific fluorescein monoclonal antibodies (Monofluo, Bio-Rad Laboratories, USA). Agreement between the methods were investigated by Kappa analysis. Moderate level agreement was determined for both swab (k= 0.7) and CSF (k= 0.6) specimens for the tested methods when cell culture was considered as the reference method. In conclusion for swab specimens, primarily DFA which is a practical and rapid method, could be applied. This step might be followed by PCR and cell culture techniques sequentially. On the other hand CSF specimens should be investigated by the rapid and more sensitive PCR method.

Anahtar Kelime:

Konular: Mikrobiyoloji Hematoloji Biyoteknoloji ve Uygulamalı Mikrobiyoloji Viroloji Enfeksiyon Hastalıkları

Belge Türü: Makale Makale Türü: Araştırma Makalesi Erişim Türü: Bibliyografik

1.Jerome KR, Ashley RL. Herpes simplex viruses and herpes B virus, pp: 1291 -303. In: Murray PR (ed), Manual of Clinical Microbiology. 2003, 8th ed. ASM Press, Washington DC.
2.Ustaçelebi Ş. Diagnosis of herpes simplex virus infections. J Clin Virol 2001; 21: 255-9.
3.Cinque P, Cleator GM, Weber T, et al. The role of laboratory investigation in the diagnosis and management of patients with suspected herpes simplex encephalitis: a consensus report. The EU Concerted Action on Virus Meningitis and Encephalitis, j Neurol Neurosurg Psych 1996; 61: 339-45.
4.Sauerbrei A, Wutzler P. Laboratory diagnosis of central nervous system caused by herpes viruses. J Clin Virol 2002; 25: 45-51.
5.Cinque P, Bossolasco S, Lundkvist A. Molecular analysis of cerebrospinal fluid in viral diseases of the central nervous system. J Clin Virol 2003; 26: 1-28.
6.Serter D. Herpes simplex virüsler, s: 1176-86. Topçu AW, Söyletir G, Doğanay M (ed), Infeksiyon Hastalıkları ve Mikrobiyolojisi. 2002, 2. baskı. Nobel Tıp Kitabevleri, İstanbul.
7.Mitchell PS, Espy MJ, Smith TF, et al. Laboratory diagnosis of central nervous system infections with herpes simplex virus by PCR performed with cerebrospinal fluid specimens. J Clin Microbiol 1997; 35: 2873-7.
8.Özdamar K. Paket programlar ile istatistiksel veri analizi-1. 2004, 5. baskı. Kaan Kitabevi, Ankara.
9.Whitley RJ, Roizman B. Herpes simplex virus infections. Lancet 2001; 357: 1513-8.
10.Jones CA, Isaacs D. Management of herpes simplex virus infections in childhood. Curr Paediatr 2004; 14: 131-6.
11.Cunningham AL, Taylor R, Taylor J, Marks C, Shaw J, Mindel A. Prevalence of infection with herpes simplex virus types 1 and 2 in Australia: a nationwide population based survey. Sex Transm Infect 2006; 82:164-8.
12.Burrows J, Nitsche A, Bayly B, Walker E, Higgins G, Kok T. Detection and subtyping of herpes simplex virus in clinical samples by Lightcyder PCR, enzyme immunoassay and cell culture. BMC Microbiol 2002; 2: 12.
13.Johnson FB, Leavitt RW, Richards DF. Comparison of the Scott Selecticult-HSV kit with conventional culture and direct immunoperoxidase staining for detection of herpes simplex virus in cultures of clinical specimens. J Clin Microbiol 1985; 21: 438-41.
14.Smalling TW, Sefers SE, Li H, et al. Molecular approaches to detecting herpes simplex virus and enterovi-ruses in the central nervous system. J Gin Microbiol 2002; 40: 2317-22.
15.Tang YW, Mitchell PS, Espy MJ, et al. Molecular diagnosis of herpes simplex virus infections in the central nervous system. J Clin Microbiol 1999; 37: 2127-36.
16.Read SJ, Burnett D, Fink CG. Molecular techniques for clinical diagnostic virology. J Clin Pathol 2000; 53: 502-6.
17.Corey L, Huang ML, Selke S, et al. Differentiation of herpes simplex virus types 1 and 2 in clinical samples by a real-time Taqman PCR assay. J Med Virol 2005; 76: 350-5.
18.Meqdam MM, Todd D, Al-Abosi M, et al. Detection of herpes simplex and varicella zoster viruses in clinical specimens using direct immunofluorescence and cell culture assays. Microbios 2001; 105: 111 -8.
19.Abd El-Aal AM, El Sayed M, Mohammed E, et al. Evaluation of herpes simplex detection in corneal scrapings by three molecular methods. Curr Microbiol 2006; 52: 379-82.
20.Biriken D, Yıldız S, Özkul A ve ark. Keratitis ve keratokonjuktivitis olgularında HSV'nin varlığının hücre kültürü izolasyonu ve direkt immünperoksidaz tekniği ile gösterilmesi. 1. Ulusal Viroloji Kongresi, Kuşadası, Aydın, 2003. Kongre Kitabı, s: 260.
21.Özgan Y, Yağmur M, Güneşli A ve ark. Herpetik keratit tanısında polimeraz zincir reaksiyonu tekniği ile herpes simpleks virüs tip 1 tespiti. 1. Ulusal Viroloji Kongresi, Kuşadası, Aydın, 2003. Kongre Kitabı, s: 334.
22.Bozkaya E. İstanbul Tıp Fakültesi, Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Temel İmmünoloji ve Viroloji Bilim Dalında Kasım 1993-Kasım 1995 yılları arasında herpes simplex virüs izolasyonu. Türk Mikrobiyoloji Cemiyeti Derg 1995; 25: 125-30.
23.Hukkanen V, Vuorinen T. Herpesviruses and enteroviruses in infections of the CNS: a study using time-resolved fluorometry PCR. J Clin Virol 2002; 25: 87-94.
24.Tafreshi NK, Sadeghizadeh M, Amini-Bavil-Olyaee S, et al. Development of a multiplex nested consensus PCR for detection and identification of major human herpesviruses in CNS infections. J Clin Virol 2005; 32: 318-24.
25.Calvario A, Bozzi A, Scarasciulli M, et al. Herpes consensus PCR test: a useful diagnostic approach to the screening of viral diseases of the central nervous system. J Clin Virol 2002; 25: 71-8.
26.Eroğlu C, Güldiken T, Sarıkaya H ve ark. Herpes simplekse bağlı meningoensefalitlerin RT-PCR metodu ile saptanması. 2. Ulusal Viroloji Kongresi, Kemer, Antalya, 2005. Kongre Kitabı, s: 230.
27.Dağlar D, Özcan A, Dilara I ve ark. BOS örneklerinde herpes simpleks virüs DNA'sının gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu ile saptanması. 2. Ulusal Viroloji Kongresi, Kemer, Antalya, 2005. Kongre Kitabı, s: 281.
28.Akçalı A, Özkaya E, Yılmaz D. Viral meningoensefalit şüpheli vakaların beyin omurilik sıvısı örneklerinde herpes simpleks virüs araştırılması. 3. Ulusal Moleküler ve Tanısal Mikrobiyoloji Kongresi, Ankara, 2004. Kongre Kitabı, s: 230.
29.Ergünay K, Gülmez D, Hasçelik G ve ark. Herpes simpleks virüs tanısında RT-PCR: Hacettepe deneyimi. 2. Ulusal Viroloji Kongresi, Kemer, Antalya, 2005. Kongre Kitabı, s: 310.
30.Rota S, Bozdayı G, Doğan B ve ark. Herpes simpleks virüsün klinik örneklerde RT-PCR ile saptanmasının önemi. 1. Ulusal Viroloji Kongresi, Kuşadası, Aydın, 2003. Kongre Kitabı, s: 333.
31.Mengelle C, Sandres-Saune K, Miedouqe M, et al. Use of two real-time PCR's to detect herpes simplex type 1 and 2-DNA after automated extraction of nucleic acid, j Med Virol 2004; 74: 459-62.
32.Madhavan HN, Priya K, Anand AR, et al. Detection of HSV genome using PCR in clinical samples comparison of PCR with standart laboratory methods for the detection of HSV in cerebrospinal fluid specimens. J Clin Virol 1999; 14; 145-51.

APA	YAĞMUR G, ÖZBAL Y, gökahmetoğlu s (2010). Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması. , 47 - 56.
Chicago	YAĞMUR Gülhan,ÖZBAL Yusuf,gökahmetoğlu selma Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması. (2010): 47 - 56.
MLA	YAĞMUR Gülhan,ÖZBAL Yusuf,gökahmetoğlu selma Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması. , 2010, ss.47 - 56.
AMA	YAĞMUR G,ÖZBAL Y,gökahmetoğlu s Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması. . 2010; 47 - 56.
Vancouver	YAĞMUR G,ÖZBAL Y,gökahmetoğlu s Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması. . 2010; 47 - 56.
IEEE	YAĞMUR G,ÖZBAL Y,gökahmetoğlu s "Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması." , ss.47 - 56, 2010.
ISNAD	YAĞMUR, Gülhan vd. "Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması". (2010), 47-56.

APA	YAĞMUR G, ÖZBAL Y, gökahmetoğlu s (2010). Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni, 44(1), 47 - 56.
Chicago	YAĞMUR Gülhan,ÖZBAL Yusuf,gökahmetoğlu selma Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni 44, no.1 (2010): 47 - 56.
MLA	YAĞMUR Gülhan,ÖZBAL Yusuf,gökahmetoğlu selma Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni, vol.44, no.1, 2010, ss.47 - 56.
AMA	YAĞMUR G,ÖZBAL Y,gökahmetoğlu s Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni. 2010; 44(1): 47 - 56.
Vancouver	YAĞMUR G,ÖZBAL Y,gökahmetoğlu s Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni. 2010; 44(1): 47 - 56.
IEEE	YAĞMUR G,ÖZBAL Y,gökahmetoğlu s "Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması." Mikrobiyoloji Bülteni, 44, ss.47 - 56, 2010.
ISNAD	YAĞMUR, Gülhan vd. "Herpes simpleks virüs (HSV) enfeksiyonu şüphesi olan hastaların klinik örneklerinde üç farklı yöntemle HSV varlığının araştırılması". Mikrobiyoloji Bülteni 44/1 (2010), 47-56.