Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması

ÇERİKCİOĞLU, Nilgün; AKYOL, Volkan

Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması

Volkan AKYOL, (Marmara Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, İstanbul, Türkiye)

Nilgün ÇERİKCİOĞLU (Marmara Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, İstanbul, Türkiye)

Mikrobiyoloji Bülteni

3 0

Yıl: 2010 Cilt: 44 Sayı: 4 Sayfa Aralığı: 605 - 617 Metin Dili: Türkçe İndeks Tarihi: 29-07-2022

Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması

Öz:

Son yıllarda tüm dünyada Candida parapsilosis’e bağlı sistemik kandidiyaz olgularının görülme sıklığında artış vardır. Ancak bu enfeksiyonların epidemiyolojik değerlendirilmesi için belirlenmiş standart bir genotiplendirme yöntemi bulunmamaktadır. Bu çalışmada, morfotiplendirmenin C.parapsilosis enfeksiyonlarının epidemiyolojisinde, genotiplendirmenin yerine kullanılabilirliği ve belirli morfotiplerde olası virülans faktörlerinin [fosfolipaz, esteraz, asit proteinaz, sıvışık örtü (slime) üretimi ve hidrofobisite] belirlenmesi amaçlanmıştır. Buna yönelik olarak Marmara Üniversitesi Hastanesinde yatan hastaların kan (n= 40) ve idrar (n= 13) kültürlerinden izole edilen 53 C.parapsilosis suşunun Sabouraud-trifeniltetrazolyum agarda (STTZ) yüzey ve renk özellikleri, malt özütlü agarda (MA) ise yüzey özellikleri dikkate alınarak morfotiplendirmeleri yapılmış ve 10 farklı alt grup elde edilmiştir. İzolatların genotiplendirmesi için RAPD-PCR (Random Amplified Polymorphic DNA-Polymerase Chain Reaction) yöntemi kullanılmış ve %90.6’sı tip II olmak üzere üç farklı genotip elde edilmiştir. Yumurta sarılı (pH: 4.2) besiyerinde yapılan deneylerin sonucunda hiçbir izolatta fosfolipaz üretimi saptanmamıştır. Tween-80’li agarda incelenen esteraz aktivitesi de, bir izolat dışında olumsuz olarak bulunmuştur. Salgısal asit proteinaz aktivitesinin saptanması amacıyla sığır serum albumini içeren (pH: 5.0) besiyeri kullanılmış ve suşların 40 (%75.4)’ında orta düzey pozitiflik (+), 7 (%13.2)’sinde ise kuvvetli pozitiflik (++) saptanırken, 6 (%11.3)’sı negatif sonuç vermiştir. Glukoz (%8) içeren Sabouraud buyyon (SB) kullanılarak sıvışık örtü üretimi değerlendirildiğinde, suşların %67.9’u negatif bulunmuş; %20.7’si zayıf (+), %7.5’i orta düzeyde (++) ve %3.7’si kuvvetli (+++) pozitif aktivite göstermiştir. Hekzadekanlı hidrokarbon aderens yöntemi ile izolatların yüzey hidrofobisite özellikleri araştırıldığında ise bir izolat az, diğerleri orta düzeyde hidrofobik olarak bulunmuştur. Elde edilen veriler kıyaslandığında morfotiplendirmenin genotiplendirmeye göre üstünlüğü belirlenememiştir. Ek olarak virülans faktörleri açısından da belirli bir morfotiple bağlantı kurulabilecek bir özellik saptanmamıştır.

Anahtar Kelime:

Konular: Biyoloji Mikrobiyoloji Biyoteknoloji ve Uygulamalı Mikrobiyoloji

Morphotyping, genotyping and investigation of some virulence factors in different morphotypes of candida parapsilosis clinical isolates

Öz:

In recent years there is an increase in frequency of systemic candidiasis cases caused by Candida parapsilosis. However there isn’t any standardized genotyping method to be used in epidemiology of those infections. In this study we aimed to determine utility of morphotyping instead of genotyping to study the epidemiology of 53 C.parapsilosis strains isolated from blood (n= 40) and urine (n= 13) cultures of inpatients at Marmara University Hospital, Istanbul, Turkey. The isolates were morphotyped according to their surface and color properties on Sabouraud-triphenyltetrazolium agar (STTZ) and surface characteristics on malt extract agar (MA) media and 10 different subgroups were obtained. In order to genotype the strains, RAPD-PCR (Random Amplified Polymorphic DNA-Polymerase Chain Reaction) method was used and three different genotypes were obtained comprising mostly type II (90.6%). One of the putative virulence factors investigated in the isolates was phospholipase activity. Phospholipase production was not detected in any of the strains on egg-yolk agar (pH: 4.2). Esterase activity of the strains on Tween-80 agar was negative except for one. In order to observe acid proteinase activity, bovine serum albumin containing (pH: 5.0) agar was used and in 11.3% of the strains no acid proteinase activity was seen while in 75.5% moderate (+), in 13.2% strong (++) activity was detected. Slime production was investigated in 8% glucose containing Sabouraud broth (SB) medium and 67.9 % of the strains were found to be negative; while 20.7% were weakly (+), 7.5% were moderately (++) and 3.7% were strongly (+++) positive. Hydrophobicity of the strains was evaluated by using hexadecane hydrocarbon adherence assay and one isolate was weakly hydrophobic while the remaining strains were found to be moderately hydrophobic. We could not observe superiority of morphotyping over genotyping. Additionally no property was found to associate with a certain morphotype, in terms of virulence factors.

Anahtar Kelime:

Konular: Biyoloji Mikrobiyoloji Biyoteknoloji ve Uygulamalı Mikrobiyoloji

Belge Türü: Makale Makale Türü: Araştırma Makalesi Erişim Türü: Bibliyografik

1. Branchini ML, Pfaller MA, Rhine-Chalberg J, Frempong T, Isenberg HD. Genotypic variation and slime production among blood and catheter isolates of Candida parapsilosis. J Clin Microbiol 1994; 32: 452-6.
2. Kuhn DM, Chandra J, Muhkherjee PK, Ghannoum MA. Comparison of biofilms formed by Candida albicans and Candida parapsilosis on bioprosthetic surfaces. Infect Immun 2002; 70: 878-88.
3. Larone DH. Medically Important Fungi: A Guide to Identification. 2002, 4th ed. ASM Press, Washington, DC.
4. Chakrabarti A, Nayak N, Talwar P. In vitro proteinase production by Candida species. Mycopathologia 1991; 14: 163-8.
5. Dağdeviren M, Çerikçioğlu N, Karavuş M. Hastanede yatan fungemili hastalardan izole edilen Candida parapsilosis kökenlerinin virulans faktörleri. Türk Mikrobiyol Cem Derg 2003; 33: 315-22.
6. Dağ A, Çerikçioğlu N. Hastanede yatan hastaların klinik örneklerinden izole edilen Trichosporon asahii suşlarında bazı virulans faktörlerinin araştırılması. Mikrobiyol Bul 2006; 40: 225-35.
7. Keçeli SA, Budak F. Candida türlerinde esteraz aktivitesi. Mikrobiyol Bul 2004; 38: 99-103.
8. Slifkin M. Tween 80 opacity test responses of various Candida species. J Clin Microbiol 2000; 38: 4626-8.
9. Yücesoy M, Marol S. Candida türlerinin esteraz aktivitesinin belirlenmesi. Mikrobiyol Bul 2003; 37: 59-63.
10. Dolapçı İ, Tekeli A. Çeşitli Candida türlerinde slime faktörü yapımının araştırılması. Mikrobiyol Bul 2002; 36: 323-8.
11. Ozkan S, Kaynak F, Kalkancı A, Abbasoğlu U, Kustimur S. Slime production and proteinase activitiy of Candida species isolates from blood samples and the comparison of these activities with minimum inhibitory concentration values of antifungal agents. Mem Inst Oswaldo Cruz Rio de Janeiro 2005; 100: 319-24.
12. Pfaller MA, Messer SA, Hollis RJ. Variations in DNA subtype antifungal susceptibility and slime production among clinical isolates of Candida parapsilosis. Diagn Microbiol Infect Dis 1995; 21: 9-14.
13. Yücesoy M, Karaman M. Candida türlerinin biyofilm üretimi ve antifungal duyarlılık paternleri. Mikrobiyol Bul 2004; 38: 91-8.
14. Hazen KC, Plotkin BJ, Klimas DM. Influence of growth conditions on cell surface hydrophobicity of Candida albicans and Candida glabrata. Infect Immun 1986; 54: 269-71.
15. Minagi S, Miyake Y, Fujioka Y, Tsuru H, Suginaka H. Cell-surface hydrophobicity of Candida species as determined by the contact-angle and hydrocarbon-adherence methods. J Gen Microbiol 1986; 132: 1111-5.
16. Sweet SP, Macfarlane TW, Samaranayake LP. Determination of the cell surface hydrophobicity of oral bacteria using of modified hydrocarbon adherence method. Fems Microbiology Letters 1987; 48: 159-63.
17. Bernardis FD, Mondello F, Millan RS, Ponton J, Cassone A. Biotyping and virulence properties of skin isolates of Candida parapsilosis. J Clin Microbiol 1999; 37: 3481-6.
18. Cassone A, Bernardis FD, Pontieri E, et al. Biotype diversity of Candida parapsilosis and its relationship to the clinical source and experimental pathogenicity. J Infect Dis 1995; 171: 967-75.
19. Cook WL, Schlitzer RL. Isolation of Candida albicans from freshwater and sewage. Appl Enviromen Microbiol 1981; 41: 840-2.
20. Garcia San Miguel L, Pla J, Cobo J, et al. Morphotypic and genotypic characterization of sequential Candida parapsilosis isolates from an outbreak in a pediatric intensive care unit. Diagn Microbiol Infect Dis 2004; 49: 189-96.
21. Phongpaichit S, Mackenzie DW, Fraser C. Strain differentiation of Candida albicans by morphotyping. Epidemiol Infect 1987; 99: 421-8.
22. Quindos G, Fernandez-Rodriguez M, Burgos A, Tellaetxe M, Cisterna R, Ponton J. Colony morphotype on sabouraud-triphenyltetrazolium agar: a simple and inexpensive method for Candida subspecies discrimination. J Clin Microbiol 1992; 30: 2748-52.
23. Medrano DJ, Brilhante RS, Cordeiro Rde A, Rocha MF, Rabenhorst SH, Sidrim JJ. Candidemia in a Brazilian hospital: the importance of Candida parapsilosis. Rev Inst Med Trop Sao Paulo 2006; 48: 17-20.
24. Almirante B, Rodriquez D, Cuenca-Estrella M, et al; Barcelona Candidemia Project Study Group. Epidemiology, risk factors and prognosis of Candida parapsilosis blodstream infections: case-control population-based surveillance study of patients in Barcelona, Spain 2002 to 2003. J Clin Microbiol 2006; 44: 1681-5.
25. Kuhn DM, Mukherjee PK, Clark TA, et al. Candida parapsilosis characterization in an outbreak setting. Emerg Infect Dis 2004; 10: 1074-81.
26. Lupetti A, Tavanti A, Davini P, et al. Horizontal transmission of Candida parapsilosis in a neonatal intensive care unit. J Clin Microbiol 2002; 40: 2363-9.
27. Gacser A, Trofa D, Schäfer W, Nosanhuck JD. Targeted gene deletion in Candida parapsilosis demonstrates the role of secreted lipase in virulence. J Clin Invest 2007; 117: 3049-58.
28. Rosenberg M, Gutnick D, Rosenberg E. Adherence of bacteria to hydrocarbons: a simple method for measuring cell-surface hydrophobicity. FEMS Microbiol Lett 1980; 9: 29-33.
29. Panagoda GJ, Ellepola AN, Samaranayake LP. Adhesion of Candida parapsilosis to epithelial and acrylic surface correlates with cell surface hydrophobicity. Mycoses 2001; 44: 29-35.

APA	AKYOL V, ÇERİKCİOĞLU N (2010). Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması. , 605 - 617.
Chicago	AKYOL Volkan,ÇERİKCİOĞLU Nilgün Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması. (2010): 605 - 617.
MLA	AKYOL Volkan,ÇERİKCİOĞLU Nilgün Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması. , 2010, ss.605 - 617.
AMA	AKYOL V,ÇERİKCİOĞLU N Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması. . 2010; 605 - 617.
Vancouver	AKYOL V,ÇERİKCİOĞLU N Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması. . 2010; 605 - 617.
IEEE	AKYOL V,ÇERİKCİOĞLU N "Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması." , ss.605 - 617, 2010.
ISNAD	AKYOL, Volkan - ÇERİKCİOĞLU, Nilgün. "Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması". (2010), 605-617.

APA	AKYOL V, ÇERİKCİOĞLU N (2010). Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni, 44(4), 605 - 617.
Chicago	AKYOL Volkan,ÇERİKCİOĞLU Nilgün Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni 44, no.4 (2010): 605 - 617.
MLA	AKYOL Volkan,ÇERİKCİOĞLU Nilgün Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni, vol.44, no.4, 2010, ss.605 - 617.
AMA	AKYOL V,ÇERİKCİOĞLU N Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni. 2010; 44(4): 605 - 617.
Vancouver	AKYOL V,ÇERİKCİOĞLU N Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni. 2010; 44(4): 605 - 617.
IEEE	AKYOL V,ÇERİKCİOĞLU N "Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması." Mikrobiyoloji Bülteni, 44, ss.605 - 617, 2010.
ISNAD	AKYOL, Volkan - ÇERİKCİOĞLU, Nilgün. "Candida parapsilosis klinik izolatlarının morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virülans faktörlerinin araştırılması". Mikrobiyoloji Bülteni 44/4 (2010), 605-617.