Yıl: 2021 Cilt: 40 Sayı: 1 Sayfa Aralığı: 25 - 30 Metin Dili: Türkçe DOI: 10.30782/jrvm.903846 İndeks Tarihi: 30-01-2023

Liyofilizasyon Amaçlı Kullanılan Sulandırıcıların Koç Spermasının DNA Bütünlüğü Üzerine Etkisi

Öz:
DNA hasarının belirlenebilmesi, sperma saklama yöntemlerinin geliştirilmesi açısından önemlidir. Biz çalışmamızda farklı liyofilizasyon medyumları kullanılarak saklanan sperm hücrelerinin DNA bütünlüğünün değerlendirilmesinde akridin oranj (AO) ve therminal deoxynucleotidyl transferase-medited dUDP nick and labelling (TUNEL) floresan boyama yöntemlerini kullandık. Koçlardan alınan sperma dört gruba bölündü ve her bir grup: I) %10 fötal buzağı serumu (FCS) içeren TCM 199 solüsyonu II) %10 FCS ve 0,2 mol/L trehaloz içeren TCM 199 solüsyonu III) 50 mmol/L NaCl ve EGTA [Ethylen glycol-bis (β-aminoethyl ether)-N, N, N, N,-tetraacetic acid] 10 mmol/L Tris solüsyonu ve IV) %20 yumurta sarısı ve %7 gliserol içeren Tris bazlı solüsyonlardan biri ile konsantrasyonu 10 x 106 spermatozoa/100 μL olacak şekilde sulandırıldı. Taze alınan spermada DNA fragmentasyon oranı AO ve TUNEL yöntemlerinde sırasıyla %2,0 ±1,2 ve %3,8±3,7 olarak tespit edildi (P>0.05). AO ve TUNEL yöntemiyle değerlendirilen liyofilizasyon sonrası DNA bütünlüğüne sahip spermatozoa oranlarının, sulandırıcı farklılığına göre etkilenmediği tespit edildi (P>0.05). Aynı şekilde her iki boyama yöntemi karşılaştırıldığında, liyofilizasyon sonrası elde edilen DNA bütünlüğünün değerlendirilmesinde AO ve TUNEL sonuçlarının istatistiksel olarak farklı olmadığı belirlendi (P>0.05). Çalışmamızın sonuçları; sulandırıcı gruplarından her birinin koç spermasının liyofilizasyonu için uygun olduğunu ve her iki boyama yönteminin de tercih edilebileceğini göstermektedir.
Anahtar Kelime: koç sperması liyofilizasyon DNA bütünlüğü tunel akridin oranj

Effect of Freeze-Drying Extenders on Ram Sperm DNA Integrity

Öz:
The ability to detect nuclear damage is an important tool for the development of sperm preservation methods. We used the acridine orange (AO) and the therminal deoxynucleotidyl transferase-medited dUDP nick and labelling (TUNEL) assay to evaluation of DNA status of sperm cells preserved with different lyophilization media. Collected ram semen were divided into four groups and diluted to a 10x106 spermatozoa/100μL with one of the extender: I) TCM 199 contained 10% fetal calf serum (FCS), II) TCM 199 contained 10% FCS and 0,2 mol/L trehaloz, III) 10 mmol/L Tris contained 50 mmol/L NaCl and EGTA [Ethylen glycol-bis (β-aminoethyl ether)-N, N, N, N,-tetraacetic acid] and IV) Tris based semen extender contained 20% egg yolk and 7% glycerol and then diluted semen were lyophilized. Freshly collected semen DNA fragmentation rate was 2,0% ±1,2 and 3,8%±3,7 obtained by AO and TUNEL assay, respectively (P>0.05). The DNA integrity of rehydrated spermatozoa as determined by AO and TUNEL assays were not affected by freeze-drying extender (P>0.05). Similar results were obtained by AO and TUNEL assays after rehydration (P>0.05). The results of this study showed that each of the diluent groups is suitable for lyophilization of ram semen and that both staining methods can be preferred.
Anahtar Kelime: ram semen lyophilization DNA integrity tunel acridine orange

Belge Türü: Makale Makale Türü: Araştırma Makalesi Erişim Türü: Erişime Açık
0
0
0
  • 1. Hara H, Tagiri M, Hwang IS, et al. Adverse effect of cake collapse on the functional integrity of freeze dried bull spermatozoa. Cryobiology 2014; 68: 354–360.
  • 2. Keskintepe L, Pacholczyk G, Machnicka A, et al. Bovine blastocyst development from oocytes injected with freeze-dried spermatozoa. Biol Reprod. 2002; 67: 409-415.
  • 3. Choi YH, Varner D, Love CC, et al. Production of live foals via intracytoplasmic injection of lyophilized sperm and sperm extract in the horse. Reproduction 2011; 142 (4): 529-538.
  • 4. Kaneko T, Whittingham DG, Yanagimachi R. Effect of pH value of freeze-drying solution on the chromosome integrity and developmental ability of mouse spermatozoa. Biol Reprod. 2003; 68: 136-139.
  • 5. Nanassy L, Leeb K, Javora A, et al. Changes in MPF and MAPK activities in porcine oocytes activated by different methods. Theriogenology 2007; 68: 146 –152.
  • 6. Liu, JL, Kusakabe H, Chang CC, et al. Freeze-dried sperm fertilization leads to full-term development in rabbits. Biol Reprod. 2004; 70: 1776-1781.
  • 7. Nur Z, Birler S, Üstüner B, et al. Koç spermasının liyofilizasyonu ve intra-stoplazmik sperm enjeksiyonu yöntemi ile embriyo üretimi, 2009; TEBAG- 108R018.
  • 8. Üstüner B, Pabuccuoglu S, Demir K, et al. Liyofilize koç sperm plazma membranının embriyonik gelişim üzerine etkileri, 2013; TOVAG-113O593.
  • 9. Wakayama T, Yanagimachi R. Development of normal mice from oocytes injected with freeze-dried spermatozoa. Nat Biotechnol. 1998; 16: 639-641.
  • 10. Matsukawa, K., Wagyu calf born after conception with freeze-dried semen in Japan. https://english.kyodonews.net/news/2020/04/61b68b6dbd2a-wagyu-calfborn-after-conception-with-freeze-dried-semen-injapan.html?phrase=postwords=&words=, Accessed Apr 18, 2020.
  • 11. Kusakabe H, Szczygiel MA, Whittingham DG, et al. Maintenance of genetic integrity in frozen and freezedried mouse spermatozoa. Proc Natl Acad Sci USA 2001; 98: 13501–13506.
  • 12. Olaciregui, M, Gil L. Freeze-dried spermatozoa: a future tool? Reprod Dom Anim. 2017; 52 (2): 248–254.
  • 13. Kaneko T, Nakagata N. Improvement in the long-term stability of freeze-dried mouse spermatozoa by adding of a chelating agent. Cryobiology 2006; 53: 279–282.
  • 14. Erenpreiss J, Jepson K, Giwercman A, et al. Toluidine blue cytometry test for sperm DNA conformation: comparison with the flow cytometric sperm chromatin structure and TUNEL assays. Hum Reprod. 2004; 19 (10): 2277-2282.
  • 15. Rigler R. Microfluorometric characterization of intracellular nucleic acids and nucleoproteins by acridine orange. Acta Physiol Scand. 1966; 67 (267): 1-122.
  • 16. Barroso G, Morshedi M, Oehninger S. Analysis of DNA fragmentation, plasma membrane translocation of phosphatidylserine and oxidative stress in human spermatozoa. Hum Reprod. 2000; 15 (6): 1338-1344.
  • 17. Nur Z, Zik B, Ustuner B, et al. Effects of different cryoprotective agents on ram sperm morphology and DNAintegrity. Theriogenology 2010; 73 (9):1267- 1275.
  • 18. Martins CF, Dode MN, Báo, SN, et al. The use of the acridine orange test and the TUNEL assay to assess the integrity of; freeze-dried bovine spermatozoa DNA. Genet Mol Res. 2007; 6: 94-104.
  • 19. Benchaib M, Braun V, Lornage J, et al. Sperm DNA fragmentation decreases the pregnancy rate in an assisted reproductive technique. Hum Reprod. 2003; 18: 1023-1028.
  • 20. Bailey JL, Bilodeau JF, Cormier N. Semen cryopreservation in domestic animals: a damaging and capacitating phenomenon. J Androl. 2000; 21: 1–7.
  • 21. Koppers AJ, De Iuliis GN, Finnie JM, et al. Significance of mitochondrial reactive oxygen species in the generation of oxidative stress in spermatozoa. J Clin Endocrinol Metab. 2008; 93: 3199–3207.
  • 22. Alcay S, Toker B, Ustuner B, et al. Investigation of relationships between DNA integrity and fresh semen parameters in rams. Kafkas Univ Vet Fak Derg. 2014; 20 (5): 793-798.
  • 23. Takeda K, Uchiyama K, Kinukawa M, et al. Evaluation of sperm DNA damage in bulls by TUNEL assay as a parameter of semen quality. J Reprod Dev. 2015; 61 (3): 185–190.
  • 24. Nakai M, Kashiwazaki N, Takizawa A, et al. Effects of chelating agents during freeze-drying of boar spermatozoa on DNA fragmentation and on developmental ability in vitro and in vivo after intracytoplasmic sperm head injection. Zygote 2007; 15 (1): 15-24.
  • 25. Olaciregui M, Luño V, Marti JI, et al. Freeze-dried stallion spermatozoa: evaluation of two chelating agents and comparative analysis of three sperm DNA damage assays. Andrologia 2016; 48: 988–994.
  • 26. Molina MC, Armstrong TK, Zhang Y, et al. The stability of lyophilized lipid/DNA complexes during prolonged storage. J Pharm Sci. 2004; 93, 2259–2273.
  • 27. Garcia de Castro A, Lapinski J, Tunnacliffe A. Anhydrobiotic engineering. Nat Biotechnol. 2000; 18: 473.
  • 28. Duran EH, Gurgan T, Gunalp S, et al. A logistic regression model including DNA status and morphology of spermatozoa for prediction of fertilization in vitro. Hum Reprod. 1998; 13: 1235-1239.
  • 29. Evenson DP, Jost LK, Marshall D, et al. Utility of the sperm chromatin structure assay as a diagnostic and prognostic tool in the human fertility clinic. Hum Reprod. 1999; 14 (4): 1039-1049.
APA ustuner b, Birler S, ZIK B, Alçay S, Bakırer öztürk G, guler s, SAĞIRKAYA H, NUR Z, PABUCCUOGLU S (2021). Liyofilizasyon Amaçlı Kullanılan Sulandırıcıların Koç Spermasının DNA Bütünlüğü Üzerine Etkisi. , 25 - 30. 10.30782/jrvm.903846
Chicago ustuner burcu,Birler Sema,ZIK Berrin,Alçay Selim,Bakırer öztürk Gül,guler sabire,SAĞIRKAYA Hakan,NUR ZEKARIYA,PABUCCUOGLU SERHAT Liyofilizasyon Amaçlı Kullanılan Sulandırıcıların Koç Spermasının DNA Bütünlüğü Üzerine Etkisi. (2021): 25 - 30. 10.30782/jrvm.903846
MLA ustuner burcu,Birler Sema,ZIK Berrin,Alçay Selim,Bakırer öztürk Gül,guler sabire,SAĞIRKAYA Hakan,NUR ZEKARIYA,PABUCCUOGLU SERHAT Liyofilizasyon Amaçlı Kullanılan Sulandırıcıların Koç Spermasının DNA Bütünlüğü Üzerine Etkisi. , 2021, ss.25 - 30. 10.30782/jrvm.903846
AMA ustuner b,Birler S,ZIK B,Alçay S,Bakırer öztürk G,guler s,SAĞIRKAYA H,NUR Z,PABUCCUOGLU S Liyofilizasyon Amaçlı Kullanılan Sulandırıcıların Koç Spermasının DNA Bütünlüğü Üzerine Etkisi. . 2021; 25 - 30. 10.30782/jrvm.903846
Vancouver ustuner b,Birler S,ZIK B,Alçay S,Bakırer öztürk G,guler s,SAĞIRKAYA H,NUR Z,PABUCCUOGLU S Liyofilizasyon Amaçlı Kullanılan Sulandırıcıların Koç Spermasının DNA Bütünlüğü Üzerine Etkisi. . 2021; 25 - 30. 10.30782/jrvm.903846
IEEE ustuner b,Birler S,ZIK B,Alçay S,Bakırer öztürk G,guler s,SAĞIRKAYA H,NUR Z,PABUCCUOGLU S "Liyofilizasyon Amaçlı Kullanılan Sulandırıcıların Koç Spermasının DNA Bütünlüğü Üzerine Etkisi." , ss.25 - 30, 2021. 10.30782/jrvm.903846
ISNAD ustuner, burcu vd. "Liyofilizasyon Amaçlı Kullanılan Sulandırıcıların Koç Spermasının DNA Bütünlüğü Üzerine Etkisi". (2021), 25-30. https://doi.org/10.30782/jrvm.903846
APA ustuner b, Birler S, ZIK B, Alçay S, Bakırer öztürk G, guler s, SAĞIRKAYA H, NUR Z, PABUCCUOGLU S (2021). Liyofilizasyon Amaçlı Kullanılan Sulandırıcıların Koç Spermasının DNA Bütünlüğü Üzerine Etkisi. Journal of research in veterinary medicine (Online), 40(1), 25 - 30. 10.30782/jrvm.903846
Chicago ustuner burcu,Birler Sema,ZIK Berrin,Alçay Selim,Bakırer öztürk Gül,guler sabire,SAĞIRKAYA Hakan,NUR ZEKARIYA,PABUCCUOGLU SERHAT Liyofilizasyon Amaçlı Kullanılan Sulandırıcıların Koç Spermasının DNA Bütünlüğü Üzerine Etkisi. Journal of research in veterinary medicine (Online) 40, no.1 (2021): 25 - 30. 10.30782/jrvm.903846
MLA ustuner burcu,Birler Sema,ZIK Berrin,Alçay Selim,Bakırer öztürk Gül,guler sabire,SAĞIRKAYA Hakan,NUR ZEKARIYA,PABUCCUOGLU SERHAT Liyofilizasyon Amaçlı Kullanılan Sulandırıcıların Koç Spermasının DNA Bütünlüğü Üzerine Etkisi. Journal of research in veterinary medicine (Online), vol.40, no.1, 2021, ss.25 - 30. 10.30782/jrvm.903846
AMA ustuner b,Birler S,ZIK B,Alçay S,Bakırer öztürk G,guler s,SAĞIRKAYA H,NUR Z,PABUCCUOGLU S Liyofilizasyon Amaçlı Kullanılan Sulandırıcıların Koç Spermasının DNA Bütünlüğü Üzerine Etkisi. Journal of research in veterinary medicine (Online). 2021; 40(1): 25 - 30. 10.30782/jrvm.903846
Vancouver ustuner b,Birler S,ZIK B,Alçay S,Bakırer öztürk G,guler s,SAĞIRKAYA H,NUR Z,PABUCCUOGLU S Liyofilizasyon Amaçlı Kullanılan Sulandırıcıların Koç Spermasının DNA Bütünlüğü Üzerine Etkisi. Journal of research in veterinary medicine (Online). 2021; 40(1): 25 - 30. 10.30782/jrvm.903846
IEEE ustuner b,Birler S,ZIK B,Alçay S,Bakırer öztürk G,guler s,SAĞIRKAYA H,NUR Z,PABUCCUOGLU S "Liyofilizasyon Amaçlı Kullanılan Sulandırıcıların Koç Spermasının DNA Bütünlüğü Üzerine Etkisi." Journal of research in veterinary medicine (Online), 40, ss.25 - 30, 2021. 10.30782/jrvm.903846
ISNAD ustuner, burcu vd. "Liyofilizasyon Amaçlı Kullanılan Sulandırıcıların Koç Spermasının DNA Bütünlüğü Üzerine Etkisi". Journal of research in veterinary medicine (Online) 40/1 (2021), 25-30. https://doi.org/10.30782/jrvm.903846