TY  - JOUR
TI  - Kanser Kökenli Hücre Dizilerinde İnfluenza Virüsünün İndüklediği Otofaji Belirteçleri ile MUC1 Ekspresyonu Arasındaki İlişkinin Araştırılması
AB  - İnfluenza virüsüne bağlı gelişen otofajiye sıklıkla apoptoz eşlik eder ve virüs ile enfekte olan hücrelerde, hücre ölümüyle sonuçlanır. Otofajinin, enerji kaynaklarının ve dış uyarıcıların varlığına yanıtta önemli rol oynayan mTOR/PI3K/Akt yolağı tarafından modüle edildiği iyi bilinmektedir. Bu yol, hücre dışı ve hücre içi bileşenlere sahip olan ve metastaz ile kemoterapötik dirençte önemli bir rol oynayan müsin 1 (MUC1) tarafından modüle edilmektedir. Bu çalışmada, influenza virüsünün hücreye inokülasyonundan sonra MUC1’in eksprese olması ve buna bağlı olarak kanserli hücrelerde mTOR ve LC3B gibi otofaji belirteçlerindeki değişiklikleri gözlemlemek amaçlanmıştır. Bu çalışmada, adenokarsinom özelliğine sahip MCF-7, He-La ve A-549 hücre dizileri kullanılmıştır. Bu hücrelerde influenza virüs üremesini kontrol etmek için ise MDCK hücre dizisine ayrıca ekim yapılmıştır. Tüm deneylerde santrifüj ile güçlendirilmiş “shell vial” hücre kültürü yöntemi kullanılmıştır. Bu hücre dizilerine influenza A (H1N1) pdm09 suşu inoküle edilip, 48 saatlik inkübasyon süresi sonunda tüm hücrelerin süpernatanlarından alınan örneklerde kantitatif gerçek zamanlı revers transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu [quantitative real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction (qRT-PCR)] yöntemiyle viral RNA düzeyinin yanı sıra, MUC1, mTOR ve LC3B ilişkili genlerin ‘cycle threshold (Ct)’ değerleri de araştırılmıştır. Bu yapıların hücrelerde bulunup bulunmadıklarını araştırmak için ayrıca, hücrelerin tümü paraformaldehit ile geçirgenleştirildikten sonra, enfekte hücrelerle kaplı lameller MUC1, mTOR, LC3B ve influenza virüs antijenlerine karşı geliştirilmiş floresanla işaretli monoklonal antikorlarla boyanmıştır. İnfluenza virüs ekimi yapılan MCF-7, He-La, A-549 hücre dizilerinde; LC3B, mTOR ve MUC1 monoklonal antikor boyamaları sonucunda floresans veren hücreler saptanmıştır. İnfluenza virüs ekimi yapılmayan tüm hücre dizilerinde (MCF-7, He-La ve A-549) ise tüm boyamalar negatif bulunmuştur. İnfluenza virüsü inoküle edilen A-549 hücre dizisinde MUC1, LC3B ve mTOR ilişkili genlerin Ct değerleri daha düşük saptanmıştır. MCF-7 ve He-La hücre dizilerindeyse protein ekspresyonu gösterilmesine karşın otofaji yolağındaki genlerin 1/Ct değerlerinde bu yönde bir değişiklik saptanmamıştır. Sadece MCF-7 hücre dizisinde MUC1 ilişkili genin inokülasyon sonrası Ct değeri daha yüksek saptanmıştır. Sonuç olarak; adenokarsinom yapısındaki hücreler içinde sadece A-549 hücre dizisinde influenza virüsü kaynaklı otofaji için özgül ekspresyon paterninin oluştuğu gözlenmiştir. Bu ilişkinin, akciğer adenokarsinomu konusundaki ileri araştırmalarda bir veri oluşturabileceği düşünülmüştür. Ancak bu öngörülerin, gelecekte yapılacak olan çalışmalarda bu genlerin protein seviyesindeki ekspresyonlarının daha ileri testler kullanılarak tespit edilmesi, daha iyi karşılaştırma sonuçlarının elde edilmesini sağlayacaktır.
AU  - Özkan, Hasan Selçuk
AU  - Özarslan, Muhammed Alper
AU  - Vatansever, Gokhan
AU  - Durmaz, Seyfi
AU  - Cicek, Candan
DO  - 10.5578/mb.20239932
PY  - 2023
JO  - Mikrobiyoloji Bülteni
VL  - 57
IS  - 3
SN  - 0374-9096
SP  - 390
EP  - 400
DB  - TRDizin
UR  - http://search/yayin/detay/1194579
ER  -