TY  - JOUR
TI  - Pastörizasyonun İnek Sütündeki Cryptosporidium parvum Canlılığı Üzerine Etkisinin Propidium Monoazide qPCR ile Araştırılması
AB  - Günümüzün en önemli besin kaynaklarından biri olan inek sütü, halk sağlığı açısından risk oluşturan birçok patojene rezervuar olabilir. Bu patojenlerden biri Cryptosporidium parvum’dur. Zorunlu intraselüler bir parazit olan C.parvum’un ookistleri, oral yolla alındığında enfeksiyona neden olmaktadır. Enfekte inek ya da buzağı dışkısı ile etrafa saçılan ookistler çiğ süte bulaşabilmekte ve bu durum süt çiftliklerinde sıkça görülmektedir. Bu çalışmada, kontamine çiğ inek sütüne ısıl işlem uygulanması sonucu C.parvum ookistlerinin canlılığını propidium monoazide (PMA)-kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu [quantitative polymerase chain reaction (qPCR)] yöntemiyle araştırılması amaçlanmıştır. Çalışmada önce pastörize edilmemiş 50 ml inek sütüne 5 X 105 C.parvum ookisti eklenerek, örnekler 1.5 ml’lik mikrosantrifüj tüplerine dağıtılmıştır. Çalışmada; kontrol grubu, pastörizasyon grubu ve kaynatma grubu olmak üzere üç grup oluşturulmuştur. Kontrol grubuna herhangi bir ısıtma işlemi uygulanmamıştır. Pastörizasyon grubunda, mikrosantrifüj tüplerindeki sütler 71.7 °C’ye ayarlanmış kuru ısı bloğu kuyucuklarına dökülmüş ve beş sn inkübe edilmiştir. Süre sonunda sütler mikropipet yardımıyla -20 °C’den çıkarılan soğuk metal tüplüğün kuyucuklarına aktarılmış ve beş sn inkübe edilmiştir. Kaynatma grubundaki sütler 95 °C’ye ayarlanmış kuru ısı bloğunda iki dk inkübe edilmiştir. Isıl işlem sonrasında mikrosantrifüj tüplerinde bulunan sütler 10 ml’lik santrifüj tüplere aktarılarak son hacim 10 ml olacak şekilde üzerlerine fosfat tampon çözeltisi [phosphate buffer saline (PBS)] eklenmiş ve 4000 rpm’de 20 dk santrifüj yapılmıştır. Bu işlem iki defa tekrarlandıktan sonra dipte kalan çökeltiye 400 µl PBS eklenerek çökelti homojen hale getirilmiştir. Her grubun bir örneğine PMA uygulanırken diğer örneğine PMA uygulanmamıştır. PMA uygulanan örnekler oda sıcaklığı ve karanlıkta beş dk inkübe edildikten sonra soğutma özelliği olan cihazda beş dk UV ışığına maruz bırakılmıştır. 5000 g’de beş dk santrifüj edilerek ookistler toplanmıştır. Ookistlerden DNA izolasyonu yapıldıktan sonra, COWP gen bölgesini amplifiye eden primerler kullanılarak SYBR Green gerçek zamanlı PCR [real-time PCR (Rt-PCR)] yapılmıştır. SYBR Green Rt-PCR sonucunda PMA uygulanmamış kontrol, pastörizasyon ve kaynatma gruplarının ortalama Ct değerleri sırasıyla 25 ± 1.24 23 ± 0.98 ve 26 ± 1.03 olarak belirlenmiştir. PMA uygulandıktan sonra kaynatma grubunda pik elde edilmezken, kontrol ve pastörizasyon gruplarında ortalama Ct değerleri sırasıyla 28 ± 1.38 ve 31 ± 1.46 olan pikler elde edilmiştir. Sonuç olarak, PMA-qPCR yöntemiyle sütlerdeki canlı C.parvum kistlerinin saptanabileceği ve pastörize sütlerde canlı ookistlerin olabileceği kanaatine varılmıştır.
AU  - HALİDİ, AHMED GALİP
AU  - AYDEMIR, SELAHATTIN
AU  - DURMAZ, HISAMETTIN
AU  - AYDEMİR, Mehmet Emin
AU  - kılıç altun, serap
AU  - Demir, Abdulbaki
AU  - ARSLAN, ALİ
DO  - 10.5578/mb.20239953
PY  - 2023
JO  - Mikrobiyoloji Bülteni
VL  - 57
IS  - 4
SN  - 0374-9096
SP  - 660
EP  - 666
DB  - TRDizin
UR  - http://search/yayin/detay/1206430
ER  -