TY  - JOUR
TI  - Kütanöz Leyşmanyazlı Olgularda Lezyondan Alınan Yayma Örneğinden PCR-RFLP ile Leishmania Türünün Araştırılması
AB  - Ülkemizde ve bölgemizde Leishmania türlerinin neden olduğu hastalık formları kütanöz ve viseral leyşmanyaz (sırasıyla, KL ve VL) olup, KL etkeninin sıklıkla L.tropica olduğu bilinmektedir. Ancak son yıllarda VL etkeni olarak bilinen L.infantum'un da KL etkeni olabileceği gösterilmiştir. KL tanısında direkt mikroskopi, serolojik testler ve kültür yöntemleri, kullanılan geleneksel yöntemlerdir. Bu yöntemlerin özgüllüğü yüksek olmakla birlikte duyarlılıkları değişkendir ve ayrıca tür tayini yapılamamaktadır. Son yıllarda, polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) temelli moleküler yöntemlerin kullanıma girmesi, tanı ve tiplendirmenin hızlı ve duyarlı olarak yapılmasına olanak sağlamıştır. Bu çalışmada, KL'li hastalarda hem tanı hem de tür tayinini aynı anda yapabilecek PCR-restriksiyon parça uzunluk polimorfi zmi (RFLP) yönteminin performansının araştırılması amaçlanmıştır. Çalışmaya, 2012-2014 yılları arasında Adnan Menderes Üniversitesi Tıp Fakültesi, Parazitoloji Laboratuvarına gelen KL şüpheli olguların deri lezyonlarından alınan örneklerden, mikroskobik incelemede Leishmania amastigotlarının saptandığı 30 yayma örneği dahil edilmiştir. Negatif kontrol olarak, Staphylococcus aureus (n= 5) ve Candida albicans'ın (n= 5) etken olduğu deri lezyonlarından alınan toplam 10 adet örnek kullanılmıştır. Yayma örneklerinden DNA izolasyonu, ticari bir kit (Macherey-Nagel NucleoSpin Tissue® Kit, Almanya) kullanılarak yapılmıştır. Pozitif kontrol olarak, kültürde çoğaltılan L.major, L.infantum ve L.tropica promastigotlarından da aynı şekilde DNA izolasyonu yapılmıştır. PCR yönteminde, ITS (internal transcribed spacer)-1 bölgesini hedefl eyen LITSR ve L 5.8S primerleri kullanılmıştır. RFLP yönteminde, amplifi ye edilen PCR ürünleri, tür tayini yapmak amacıyla BsuRI (HaeIII) restriksiyon enzimi kullanılarak kesilmiş ve tüm örneklerde (n= 30) L.tropica'ya özgü bant görüntüsü saptanmıştır. Negatif kontrol olarak kullanılan örneklerin hiçbirinde (n= 10) bant saptanmamıştır. Çalışmamızda, Aydın ilinde en yaygın görülen türün L.tropica olduğu belirlenmiştir. Sonuç olarak, KL'li hastaların klinik örneklerinde doğrudan hem parazitin tespiti hem de tür tayini için ITS-1 PCR-RFLP yönteminin, yeterli olanakları olan laboratuvarlarda rutin tanıda kullanılabileceği kanısına varılmıştır
AU  - ÖZLEM ÇALIŞKAN, Serçin
AU  - ERTABAKLAR, Hatice
AU  - ERTUĞ, Sema
AU  - BOZDOĞAN, Bülent
PY  - 2016
JO  - Mikrobiyoloji Bülteni
VL  - 50
IS  - 2
SN  - 0374-9096
SP  - 300
EP  - 306
DB  - TRDizin
UR  - http://search/yayin/detay/200298
ER  -