TY  - JOUR
TI  - An easy two-step purification method for human leucocyte myeloperoxidase
AB  - Amaç: Bu çalışmanın amacı, tek vericiden temin edilen lökositlerden miyeloperoksidaz (MPO) enzimini saflaştırmak için basit, hızlı ve ekonomik bir yöntem geliştirmektir. Çalışmada, insan lökosit miyeloperoksidaz enziminin konkanavalin A-Sefaroz 4B afinite kromatografisi ile CM-Sefadeks katyon değiştirici kromatografisinden oluşan iki basamakta saflaştırılması sunulmuştur.Metod: Saflaştırma çalışmasında, lökoferez ile tek kişiden alınmış insan lökositleri kullanıldı. Lökosit miyeloperoksidazı, %1 oranında HETAB (hekzadesiltrimetilamonyum bromide) içeren fosfat tampon içinde çözünürleştirildi ve santrifügasyonla diğer zarsal fraksiyonlardan ayrıştırıldı. Çözünürleştirilen enzim konkanavalin A-Sefaroz afinite jeline uygulandı ve bağlanan enzim bu jelden metil-a-D-manno-piranozid ile indirildi. Kromatografide MPO aktivitesi içeren fraksiyonlar birleştirildi, diyaliz edildikten sonra CM-sefadeks katyon değiştirici kolona uygulandı. Enzim bu kolondan hafif bazik pH'daki fosfat tampon içinde lineer NaCl gradient ile indirildi.Bulgular: Uygulanan iki kromatografik yöntemle MPO enzimi insan lökositlerinden %70 verimle saflaştırıldı. Enzimin saflığı, Reinheit Zahl (RZ) değeri (A430/A280) ölçülerek control edildi. Reinheit Zahl değeri saflaştırılan MPO için 0.86 olarak hesaplandı. Bu RZ değeri, daha önce literatürde saf enzim için bildirilen değerler (0.82-0.88 arasında) ve saf ticari MPO için belirlenmiş değer (0.84) ile karşılaştırıldığında, bu saflaştırma çalışması ile elde edilen enzimin saflığını gösterir.Sonuç: Önceki saflaştırma metotlarıyla karşılaştırıldığında bu metot daha yüksek geri kazanım oranı ve saflık oranını birlikte sunmaktadır. Lökofrez kaynaklı lökosit kullanımı ve amoniyum sulfat basamağının çıkarılması maliyetin azalması ve zamanın kısalmasını sağlamıştır.
AU  - KILINÇ, Kamer
AU  - AKYOL KARAAĞAÇ, Tülay
AU  - SARKARATI, Bahram
PY  - 2015
JO  - Türk Biyokimya Dergisi
VL  - 40
IS  - 5
SN  - 1303-829X
SP  - 410
EP  - 416
DB  - TRDizin
UR  - http://search/yayin/detay/206176
ER  -