Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi

ÖZDEMİR, S.; ÖZSAR, S.; SABAN, E.; GÜVEN, B.

Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi

B. GÜVEN, (Kafkas Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Fizyoloji Anabilim Dalı, Kars, Türkiye)

S. ÖZSAR, (Girilmedi)

E. SABAN, (Girilmedi)

S. ÖZDEMİR (Girilmedi)

Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi

2 0

Yıl: 1997 Cilt: 3 Sayı: 1 Sayfa Aralığı: 13 - 17 Metin Dili: Türkçe İndeks Tarihi: 29-07-2022

Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi

Öz:

Bu çalışmada total sütte progesteron tayini için çift antikorlu mikrotitrasyon plak EIA yöntemi geliştirildi. 6 $beta$ -OH-progesteron-hemisuccinate, HRP enzimi ile işaretlendi ve sephadex G-25 kolon kromatografisinden geçirilerek saflaştırıldı. Tavşanlarda progesteron-7 $infty$ -CTE-BTG'ye karşı üretilmiş olan antikor testte kullanıldı. Keçilerde tavşan IgG'sine karşı ikinci antikor üretildi ve antiserumdan IgG fraksiyonu affinite kromotografisinden geçirilerek saflaştırıldı. Testin hassasiyetinin 2 pg/kuyu, deney içi ve deneyler arası varyasyon katsayılarının %14'den düşük olduğu bulundu. Östrus siklusundaki bir inekten toplanan süt örnekleri RIA ve EIA ile analiz edildiğinde iki teknik arasındaki korelasyon %96 olarak tesbit edildi. Spektrofotometrik olarak ölçülebilen sonuçlar göz ile de değerlendirilebilmekte olup 80 örneğin analizi 4 saate tamamlanabilmektedir.

Anahtar Kelime: sığır progesteron immunoenzim teknikleri süt

Konular: Veterinerlik

Development of enzymeimmunoassay (EIA) for progesterone

Öz:

In this study a double antibody microtitration plate EIA was developed for the determination of progesterone in whole milk. 6 $beta$ -OH-Progesterone-hemisuccinate was labelled with HRP and purified through the column chrom- atography (sephadex G-25). Antiserum produced against progesterone-7 $infty$ -CTE-BTG in rabbits was used. A sec¬ond antibody against rabbit IgG was produced in goats and IgG fraction of antiserum was isolated through affinity chromatography. The sensitivity of the assay was 2 pg/well. The intra and inter assay coefficients of variation were <14%. Milk samples collected from a cow in estrus cycle were analysed using both EIA and RIA, the correlation between two techniques was obtained as 96%. The resulting color is measured by using spectrofotometer as well as by naked eye and it is possible to analyse 80 samples within 4 hours.

Anahtar Kelime: milk cattle progesterone immunoenzyme techniques

Konular: Veterinerlik

Belge Türü: Makale Makale Türü: Araştırma Makalesi Erişim Türü: Erişime Açık

1. Pope, G.S., Majzlik, I., Ball, P.J.H., Leaver, J.D.: Use of progesterone concentrations in plasma and milk in the diagnosis of pregnancy in domestic cattle. Br. Vet. J., 132:497-506, 1976.
2. Günzler, O., Ratten berger, E., Gorlack, A., Hahn, R., Hocke, P., Glaus R., Karg, H.: Milk progesterone determination as applied to the concentrations of eostrus, the detecting of cycling and as an aid to veterinarian and biotechnical measures in cows. Br. Vet. J., 135:541 -549, 1979.
3. De Kruif, A.: Factor influencing the fertility of a cattle population J. Reprod. Fert. 54:507-518, 1978.
4. Boer, G., Etches, R.J., Walton, J.S.: A solid phase radioimmunoassay for progesterone in bovine plasma. Can. J. Anim. Sci., 60:783-786, 1980.
5. Laboratory Training Manual on Radioimmunoassay in Animal Reproduction. Technical Reports Series No:223. IAEA. Viennay 85-111, 1984.
6. Munro, C., Stabenfeldt, G.: Development of a microtitre plate enzyme immunoassay for the determination of progesterone J. Endocrinol., 101:41-49, 1984.
7. Nakao, T., Suguhashi, A., Saga, N., Tsunoda, N., Kawato, K.: An improved enzyme immunoassay of progesterone applied to bovine milk. Br. Vet. J., 139:109-118,1983.
8. Van de Wiel, D.F.M., Kamonpatana, M., Ngramsurijaroy, Ch., Koops,W.,Singhanjan, S.: Enzymeimmunoassay of milk progesterone: its apllication to oestrus confirmation and early pregnancy diagnosis in cattle. Vet. Q., 4:72-78,1982.
9. Meyer, H. H. D., Güven,B., Karg, H.: Enzymimmuntests (EIA) auf mikrotitra-tionsplatten zur progesteronbestimmung in magermilchproben. Wien. Tierarztl. Monatsschr. 73:86-94, 1986.
10. Claus, R., Karg, H., Rattenberger, E., Pirchner, F.: Analyse von fortpflan-zungsproblemen bei kühen mit hilfe der progesteronebestmimung in milchfett. Zuchthyg. 17:203-213, 1982.
11. Sauer, M.J., Foulkes, J.A., O'Neill, P.M.: Use of microtitre plate EIA for direct determination of progesterone in whole milk: Application of heterologous systems for improved sensitivity. Br. Vet. J., 138:522-531, 1982.
12. Prakash, B.S., Meyer, H.H.D., and Van de Wiel, D.F.M.: Sensitive enzyme immunoassay of progesterone in skim milk using second-antibody technique. Anim. Reprod. Sci., 16:225-235, 1988.
13. Meyer, H.H.D., Güven, B.: improvement of microtitration plate enzymeimmunoassays for steroid determination by a second antibody technique. J. Steroid Biochem., 25 (suppl.) 139, 1986.
14. Prakash, B. S., Meyer, H. H.D., Schallenberger, E., Van de Wiel, D. F. M.: Development of a sensitive enzymeimmunoassay (EIA) for progesterone determination in unextracted bovine plasma using the second antibody technique. J. Steroid Biochem. 28:623-627,1987.
15. Van de Wiel, D.F.M., Koops, W.: Development and validation of an enzymeimmunoassay for progesteron in bovine milk or blood plasma. Anim. Rep. Sci., 10:201-213,1986.
16. Meyer, H.H.D.: Possible ways of improving enzymeimmunoassay (EIA) techniques and their application in animal production. IAEA-SM-292/31, 255-262, 1986.

APA	GÜVEN B, ÖZSAR S, SABAN E, ÖZDEMİR S (1997). Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi. , 13 - 17.
Chicago	GÜVEN B.,ÖZSAR S.,SABAN E.,ÖZDEMİR S. Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi. (1997): 13 - 17.
MLA	GÜVEN B.,ÖZSAR S.,SABAN E.,ÖZDEMİR S. Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi. , 1997, ss.13 - 17.
AMA	GÜVEN B,ÖZSAR S,SABAN E,ÖZDEMİR S Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi. . 1997; 13 - 17.
Vancouver	GÜVEN B,ÖZSAR S,SABAN E,ÖZDEMİR S Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi. . 1997; 13 - 17.
IEEE	GÜVEN B,ÖZSAR S,SABAN E,ÖZDEMİR S "Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi." , ss.13 - 17, 1997.
ISNAD	GÜVEN, B. vd. "Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi". (1997), 13-17.

APA	GÜVEN B, ÖZSAR S, SABAN E, ÖZDEMİR S (1997). Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi. Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi, 3(1), 13 - 17.
Chicago	GÜVEN B.,ÖZSAR S.,SABAN E.,ÖZDEMİR S. Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi. Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi 3, no.1 (1997): 13 - 17.
MLA	GÜVEN B.,ÖZSAR S.,SABAN E.,ÖZDEMİR S. Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi. Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi, vol.3, no.1, 1997, ss.13 - 17.
AMA	GÜVEN B,ÖZSAR S,SABAN E,ÖZDEMİR S Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi. Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi. 1997; 3(1): 13 - 17.
Vancouver	GÜVEN B,ÖZSAR S,SABAN E,ÖZDEMİR S Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi. Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi. 1997; 3(1): 13 - 17.
IEEE	GÜVEN B,ÖZSAR S,SABAN E,ÖZDEMİR S "Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi." Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi, 3, ss.13 - 17, 1997.
ISNAD	GÜVEN, B. vd. "Progesteron için enzimimmunoassay (EIA) tekniğinin geliştirilmesi". Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi 3/1 (1997), 13-17.