Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi

DEVECİ, Engin; İRTEGÜN KANDEMİR, SEVGİ

Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi

SEVGİ İRTEGÜN KANDEMİR, (Dicle Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Biyoloji Anabilim Dalı, Diyarbakır, Türkiye)

Engin DEVECİ (Dicle Üniversitesi Tıp Fakültesi Histoloji ve Embriyoloji Anabilim Dalı, Diyarbakır, Türkiye)

Dicle Tıp Dergisi

7 1

Yıl: 2016 Cilt: 43 Sayı: 4 Sayfa Aralığı: 527 - 533 Metin Dili: Türkçe İndeks Tarihi: 29-07-2022

Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi

Öz:

Amaç: Bu çalışmada diyabetik sıçanların tetis dokusunda anjiogenezi ve vasküler geçirgenliği stimule eden vasküler endotel büyüme faktörünün (VEGF) ve apoptozis regülasyonunda önemli bir rol oynayan B-cell lymphoma-2' nin (Bcl-2) ekspresyon düzeylerini araştırmayı amaçladık. Yöntemler: Bu çalışmada 20 adet erişkin Wistar albino sıçan kullanıldı. Sıçanlar kontrol ve Diabetes mellitus (DM) olmak üzere 2 eşit gruba ayrıldı. DM oluşturmak için sitrat tamponunda çözülmüş tek doz Streptozotosin (STZ) (55mg/kg) intraperitoneal olarak verildi. %10' luk formaldehit solüsyonuna atılan testis dokuları rutin parafin takiplerinden sonra histopatolojik olarak incelendi. VEGF ve Bcl-2 protein düzeyleri immünohistokimya ve Western Blot yöntemleriyle ölçüldü. Bulgular: Diyabetik gruba ait spermatik hücrelerin bazılarında dejenerasyon, çekirdekte küçülme ve yer yer piknosis gözlendi. Diyabet sonucu Sertoli hücrelerinde yapısal değişiklikler saptanırken, tubuller arasındaki damarlarda dilatasyon ve hemoraji gözlendi. Diyabetin etkisi ile testis dokusunda VEGF ekspresyonunun bloke olduğu, Bcl-2 ekspresyonunun ise azaldığı saptandı. Sonuç: Diyabetik testis dokularında VEGF ekspresyonunun bloke olmasının yetersiz anjiogenez ve vasküler permeabiliteye neden olabileceği olasıdır. Ayrıca diyabetik testis dokularında anti-apoptotik protein olan Bcl-2 ekspresyonundaki azalmanın diyabetin testiküler dokuda apotozis regülasyonunun bozulmasına neden olabileceği düşünülmektedir.

Anahtar Kelime:

Konular: Tıbbi Araştırmalar Deneysel Genel ve Dahili Tıp

Examining the Expression Level of VEGF and Bcl-2 By Immunohistochemistry and WesternBlot in Testis Tissue of Diabetic Rats

Öz:

Objectives: In this study, we aimed to investigate the expression levels of vascular endothelial growth factor (VEGF) which stimulates angiogenesis and vascular permeability and B-cell lymphoma-2 (Bcl-2) which plays an important role in the regulation of apoptosis in testis tissue of diabetic rats. Methods: Twenty adult Wistar albino rats were used in this study. The rats were divided into two equal groups as control and Diabetes mellitus (DM). Single dose of Streptozotosin (STZ) (55 mg/kg) dissolved in citrate buffer was injected intraperitoneally to induce DM. Tissue pieces which had been soaked in 10% formaldehyde solution were examined histologically after routine parafin follow. The expression levels of VEGF and Bcl-2 were measured by immunohistochemistry and Western Blot techniques. Results: It was observed that some spermatic cells had degeneration, nuclear contraction and picnosis in some places in DM group. While structural changes were determined in Sertoli cells, dilation and hemorrhage were observed in vessels between tubules. It was determined that VEGF expression was blocked in diabetic testis tissues, while the expression of Bcl-2 was reduced. Conclusion: Depletion of VEGF expression in diabetic testis tissues may lead to inadequate angiogenesis and vascular permeability. Moreover, a decrease in the expression of anti-apoptotic Bcl-2 in diabetic testis tissues suggests that DM may cause dysregulation of apoptosis in testicular tissue.

Anahtar Kelime:

Konular: Tıbbi Araştırmalar Deneysel Genel ve Dahili Tıp

Belge Türü: Makale Makale Türü: Araştırma Makalesi Erişim Türü: Erişime Açık

1. Mealey BL, Ocampo GL. Diabetes mellitus and periodontal disease. Periodontol 2000 2007;44:127-53.
2. American Diabetes Association. Diagnosis and classification of diabetes mellitus. Diabetes Care 2008;31:55-60.
3. Zorlu M, Helvacı A, Kıskaç M, et al. Silent myocardial ischemia and related risk factors in patients with type 2 diabetes mellitus. Dicle Med J 2010;37:140-4.
4. Cai L, Chen SL, Evans T, et al. Apoptotic germ-cell death and testicular damage in experimental diabetes: prevention by endothelin antagonism. Uro Res 2000;28:342-7.
5. Shrilatha B. Early oxidative stress in testis and epididymal sperm in streptozotocin-induced diabetic mice: its progression and genotoxic consequences. Repro Toxicol 2007; 23: 578-587.
6. Agbaje IM, Rogers DA, McVicar CM, et al. Insulin dependant diabetes mellitus: implications for male reproductive function. Hum Reprod 2007;22:1871-7.
7. Kehler DS, Stammers AN, Susser SE, et al. Cardiovascular complications of type 2 diabetes in youth. Biochem Cell Biol 2014;7:1-15.
8. Leung DW, Cachianes G, Kuang WJ, et al. Vascular endothelial growth factor is a secreted angiogenic mitogen. Science 1989;246:1306-9.
9. Neufeld G, Cohen T, Gengrinovitch S, Poltorak Z. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors. FASEB J 1999;13:9-22.
10. Caires KC, de Avila J, McLean DJ. Vascular endothelial growth factor regulates germ cell survival during establishment of spermatogenesis in the bovine testis. Reproduction 2009;138:667-77.
11. M Kanter, C. Aktas, M. Erboga. Curcumin attenuates testicular damage, apoptotic germ cell death, and oxidative stress in streptozotocin-induced diabetic rats. Mol Nutr Food Res 2013;57:1578-85.
12. Rashid K, Sil PC. Curcumin ameliorates testicular damage in diabetic rats by suppressing cellular stress-mediated mitochondria and endoplasmic reticulum-dependent apoptotic death. Biochim Biophys Acta 2015;1852:70-82.
13. Jang JH, Surh YJ: Potentiation of cellular antioxidant capacity by Bcl-2: implications for its antiapoptotic function. Biochem Pharmacol 2003;66:1371-9.
14. Masiello P, Broca C, Gross R, et al. Experimental NIDDM: development of a new model in adult rats administered streptozotocin and nicotinamide. Diabetes 1998;47:224-9.
15. Szkudelski T. The mechanism of alloxan and streptozotocin action in B cells of the rat pancreas. Physiol Res 2001;50:537- 46.
16. Lin SH, Wang ZS. Study on the expresssion of androgen receptor in testis, Epydidymis and prostate of adult rats with diabetes. Zhonghua Nan Ke Xue 2005;11:891-4.
17. Öztürk F, Gül M, Ağkadir M, Yağmurca M. Deneysel diyabetin sıçan testislerinde meydana getirdiği histolojik değişiklikler. T Klin J Med Sci 2002;22:173-8.
18. Cameron DF, Murray FT, Drylie DD. Interstitial compartment pathology and spermatogenic disruption in testes from impotent diabetic men. Anat Rec 1985;213:53-62.
19. Steger RW, Rabe MB. The effect of diabetes mellitus on endocrine and reproductive function. Proc Soc Exp Biol Med 1997;214:1-11.
20. Anderson JE, Thliveris JA. Morphometry and cytochemistry of Leydig cells in experimental diabetes. Am J Anat 1987;180:41-8.
21. Ebisch IMW, Thomas CMG, Wetzels AMM, et al. Review of the role of the plasminogen activator system and vascular endothelial growth factor in subfertility. Fertil Steril 2008;90:2340-50.
22. Reddy N, Kasukurthi KB, Mahla RS, et al. Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) transcript and protein in the testis of several vertebrates, including endangered species. Theriogenology 2012;77:608-14.
23. Yoshida A, Anand-Apte B, Zetter BR. Differential endothelial migration and proliferation to basic fibroblast growth factor and vascular endothelial growth factor. Growth Factors 1996;13:57-64.
24. Sisman AR, Kiray M, Camsari UM, et al. Potential Novel Biomarkers for Diabetic Testicular Damage in StreptozotocinInduced Diabetic Rats: Nerve Growth Factor Beta and Vascular Endothelial Growth Factor. Disease marker, http://dx.doi.org/10.1155/2014/108106.
25. Adler A. Obesity and target organ damage: diabetes. Int J Obes 2002;26:11-14.
26. Waisundara VY, Hsu A, Huang D, Tan BKH. Scutellaria baicalensis: enhances the anti-diabetic activity of metformin in streptozotocin-induced diabeticWistar rats. Am J Chinese Med 2008;36:517-40.
27. Long L, Wang J, Lu X, et al. Protective Effects of Scutellarin on Type II Diabetes Mellitus-Induced Testicular Damages Related to Reactive Oxygen Species/Bcl-2/Bax and Reactive Oxygen Species/Microcirculation/Staving Pathway in Diabetic Rat. J Diabetes Res Volume 2015, http://dx.doi.org/10.1155/2015/252530
28. Cai L, Li W, Wang G, et al. Hyperglycemia-induced apoptosis in mouse myocardium: mitochondrial cytochrome C- mediated caspase-3 activation pathway. Diabetes 2002;51:1938-48.
29. Amin AH, El-Missiry MA, Othman AI. Melatonin ameliorates metabolic risk factors, modulates apoptotic proteins, and protects the rat heart against diabetes-induced apoptosis. Eur J pharmacol 2015;747:166-73.

APA	İRTEGÜN KANDEMİR S, DEVECİ E (2016). Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi. , 527 - 533.
Chicago	İRTEGÜN KANDEMİR SEVGİ,DEVECİ Engin Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi. (2016): 527 - 533.
MLA	İRTEGÜN KANDEMİR SEVGİ,DEVECİ Engin Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi. , 2016, ss.527 - 533.
AMA	İRTEGÜN KANDEMİR S,DEVECİ E Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi. . 2016; 527 - 533.
Vancouver	İRTEGÜN KANDEMİR S,DEVECİ E Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi. . 2016; 527 - 533.
IEEE	İRTEGÜN KANDEMİR S,DEVECİ E "Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi." , ss.527 - 533, 2016.
ISNAD	İRTEGÜN KANDEMİR, SEVGİ - DEVECİ, Engin. "Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi". (2016), 527-533.

APA	İRTEGÜN KANDEMİR S, DEVECİ E (2016). Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi. Dicle Tıp Dergisi, 43(4), 527 - 533.
Chicago	İRTEGÜN KANDEMİR SEVGİ,DEVECİ Engin Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi. Dicle Tıp Dergisi 43, no.4 (2016): 527 - 533.
MLA	İRTEGÜN KANDEMİR SEVGİ,DEVECİ Engin Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi. Dicle Tıp Dergisi, vol.43, no.4, 2016, ss.527 - 533.
AMA	İRTEGÜN KANDEMİR S,DEVECİ E Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi. Dicle Tıp Dergisi. 2016; 43(4): 527 - 533.
Vancouver	İRTEGÜN KANDEMİR S,DEVECİ E Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi. Dicle Tıp Dergisi. 2016; 43(4): 527 - 533.
IEEE	İRTEGÜN KANDEMİR S,DEVECİ E "Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi." Dicle Tıp Dergisi, 43, ss.527 - 533, 2016.
ISNAD	İRTEGÜN KANDEMİR, SEVGİ - DEVECİ, Engin. "Diyabetik Sıçanların Testis Dokusunda VEGF ve Bcl-2 Ekspresyon Düzeylerinin İmmünohistokimya ve Western Blot Yöntemleri İle İncelenmesi". Dicle Tıp Dergisi 43/4 (2016), 527-533.