Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi

GÜVEN, BÜLENT; ÖZSAR, Semin; MARAŞLI, Nalan; MARAŞLI, Şaban; ÖZCAN, Ayla

Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi

Bülent GÜVEN, (Kafkas Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Fizyoloji Anabilim Dalı, Kars, Türkiye)

Semin ÖZSAR, (Girilmedi)

Nalan MARAŞLI, (Girilmedi)

Şaban MARAŞLI, (Girilmedi)

Ayla ÖZCAN (Girilmedi)

Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences

1 0

Yıl: 2003 Cilt: 27 Sayı: 1 Sayfa Aralığı: 45 - 50 Metin Dili: Türkçe İndeks Tarihi: 29-07-2022

Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi

Öz:

Bu çalışmada, plazmada testosteron tayini için çift antikorlu enzimimmunassay yöntemi geliştirildi. Testosteron 3-0-CMO, horseradish peroksidaz enzimi ile 'mixed anhydride' yöntemi kullanılarak işaretlendi ve konjugat sephadex G-25 kolon kromatografisinden geçirilerek saflaştınldı. Testosteron antikoru, tavşanlar Testosteron-3-0-CM0-BSA ile immunize edilerek üretildi. Testosteron antiserumunun çeşitli steroidler ile çapraz reaksiyon oranları %<0.01 olarak bulundu. Standart eğri 0-20 ng/ml (0-200 pg/delik) arasında olup testin hassasiyeti ise 2,5 pg/delik olarak tespit edildi. Testin kantitatif verimi % 98,8 ve deneylerarası varyasyon katsayısı %12,6 olarak bulundu. Bu çalışmada geliştirilen enzimimmunassay, testosteronun rutin tayini için ekonomik bir yöntemdir. Çok az laboratuvar cihazı gerektirdiğinden özellikle hayvancılık konusunda araştırma yapanlar için kullanışlı ve alternatif bir yöntemdir.

Anahtar Kelime: testosteron enzim bağışıklık deneyi

Konular: Ziraat Mühendisliği

Development of an enzyme immunoassay for the determination of testosterone

Öz:

In this study, a double antibody enzyme immunoassay for the direct determination of testosterone in plasma was developed. Testosterone 3-O-CMO was conjugated with horseradish peroxidase by the mixed anhydride method, and the conjugate purified by column chromatography (sephadex G-25). Testosterone antibody was obtained by immunization of rabbits against Testosterone-3-O-CMO-BSA. Cross reactions of the antiserum against some steroids were found to be <0.01%. The detection limit of the assay was 2.5 pg/well and the working range of the standard curve was 0-20 ng/ml (0-200 pg/well). The recovery was found to be 98.8% after the addition of known amounts of testosterone to plasma samples. The inter-assay coefficient of variation was 12.6%. The described EIA offers a very economical alternative for the routine estimation of testosterone levels. Only minimal laboratory equipment is required and therefore the assay should be especially useful for research in animal science.

Anahtar Kelime: testosterone enzyme immunoassay

Konular: Ziraat Mühendisliği

Belge Türü: Makale Makale Türü: Araştırma Makalesi Erişim Türü: Erişime Açık

1-Edqvist, L.E., Haggström, A., Kindhal. H., Stabenfeldt, G.H.: Radioisotopic Techniques for the Study of Reproductive Physiology in Domestic Animals. 1976; IAEA-SM-205/3: 513-524.
2-Karg, H., Claus, R., Hoffmann, B., Schallenberger, E., Schams, D.: Present Status and Future Possibilities of Radioimmunoassay in Animal Production. 1976; IAEA-SM-205/3: 487-511.
3-Edqvist, L.E., Stabenfeldt, G.H.: Clinical Reproductive Endocrinology. In Clinical Biochemistry of Domestic Animals,Fourth Edition. Academic Press, Inc. 1989; 650-677.
4.Sutama, I.K., Edey, T.N.: Postpubertal Sexual Development in. Merino Rams after Differential Feeding through Puberty.Theriogenology. 1986; 25 (4): 601-607.
5-Dufour, J.J., Fahmy, M.H., Minvielle, F.: Seasonal Changes in Breeding Activity, Testicular Size, Testosterone Concentration and Seminal Characteristics in Rams with Long or Short Breeding Season. J. Anim. Sci. 1984; 58 (2): 416-422.
6-Özsar, S., Güven, B., Çelebi, M., Kalkandelen, G., Van de Wiel D.F.M.: Testosterone and LH Concentrations in the Male Angora Goat during Puberty. Anim. Reprod. Sci. 1990; 23: 319-326.
7-Muduuli, D.S., Sanford, L.M., Palmer, W.M., Howland, B.E.: Secretory Patterns and Circadian and Seasonal Changes in Luteinizing Hormone, Follicle Stimulating Hormone Prolactin and Testosterone in the Male Pygmy Goat. J. Anim. Sci. 1979; 49 (2): 543-552.
8-Van de Wiel, D.F.M., Koops, W., Vos, E.: Enzyme and Radioimmunoassay Techniques for Hormone' Determination in Livestock. Proceedings of a Symp. Nuclear and Related Techniques in Animal Production and Health, Vienna IAEA.İ986; 17-21 March, 243-253.
9-Pratt, J.J.: Steroid Immunoassay in Clinical Chemistry. Clin.Chem.1978; 24 (11): 1-22.
10-Meyer, H.H.D.: Possible Ways of Techniques and their Application in Animal Production. Procedings of a symp., Nuclear and Related Techniques in Animal Production and Health, IAEA, Vienna. 1986;17-21 March, 255-262.
11-Tijssen, P.: Practice and Theory of Enzymeimmunoassay. Elsevier,Amsterdam. 1985; 15.
12-Pratt, J.J., Wiegman, T.. Lappöhn, R.E., Woldring, M.G.;Estimation of Plasma Testosterone without Extraction and Chromatography. Clinica Chimica Acta. 1975; 59: 337-346.
13-Laboratory Training Manual on Radioimmunoassay in Animal Reproduction. International Atomic Energy Agency., Vienna.,1984.
14- Venturelli, E., Cavalleri, A., Secreto, G.: Methods for Urinary Testosterone Analysis. J. Chromatogr. B. Biomed Appl. 1995: 15: 363-380.
15- Legrand, C, Dousset, B., Tronel, H., Belleville, F.. Nabet, P.: Measurement of Plasma Testosterone by Gas Chromatography-negative-ion Mass Spectrometry Using Pentafluoropropionic Derivatives. J. Chromatogr. B Biomed. Appl. 1995; 663/2: 187-192.
16- Tschop, M., Behre, HM., Nieschlag, E., Dressendorfer, R.A., Strasburger, CJ.: A Time-Resolved Fluorescence Immunoassay for the Measurement of Testosterone in Saliva: Monitoring of Testosterone Replacement Therapy with Testosterone Buciclate. Clin. Chem. Lab. Med. 1998; 36 (4): 223-230.
17-Erkoç, F.Ü., Özsar, S... Güven, B., Kalkandelen, G.,Uğrar,E.;High-Performance Liquid Chromatographic Analysis of Steroid Hormones. J. Chromatogr. Sci. 1989; 27: 86-90.
18-Sengupta, J., Dhar, T.K., Ali, E.: Sandwich Immunoassay of Small Molecules, Effects of Heterology and Development of a Highly Sensitive and Specific Enzyme Immunoassay for Testosterone, J.Immunol. Meth. 1992; 147: 181-188.
19-Elder, P.A., Lewis, J.G.: An Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for Plasma Testosterone. J. Steroid Biochem. 1985; 22:635-638.
20-Marcus, G.J., Durnford, R.: A Simple Enzyme Linked Immunosorbent Assay for Testosterone. Steroid. 1985; 46: 975-986.
21-Tarun, K.D., Esahak, A.: Direct Microtitre Plate Enzyme Imunnoassay of Testosterone in Unextracted Serum. J. Immunol.I Meth. 1992; 147: 167-172.
22-Esahak, A., Judhajit, S., Tarun, K.D.: Sandwich Immunoassay of Small Molecules. I. Investigation with Testosterone as Model Hapten. J. Immunol. Meth. 1992; 147: 173-179.
23-Meyer, H.H.D., Güven, B.: Improvement of Microtitration Plate Enzymeimmunoassay for Steroid Determination by a Second Antibody Technique. J. Steroid Biochem. 1986; 25: Suppl. 139.
24-Meyer, H.H.D., Güven B., Karg, H.: Enzymimmuntests (EIA) auf Mikrotitrationsplatten zur progesteronbestimmung in Magermilchproben. Wien. Tierarztl. Monatsschr. 1986; 73: 86-94.
25-Güven, B., Özsar, S., Şaban, E., Çelebi, M., Meyer, H.H.D.: Plasma FSH and LH concentrations during theestrus cycle of prolific Sakız sheep. Kafkas Univ. Vet. Fak. Derg. 1996; 2 (2): 185-192.

APA	GÜVEN B, ÖZSAR S, MARAŞLI N, MARAŞLI Ş, ÖZCAN A (2003). Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi. , 45 - 50.
Chicago	GÜVEN BÜLENT,ÖZSAR Semin,MARAŞLI Nalan,MARAŞLI Şaban,ÖZCAN Ayla Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi. (2003): 45 - 50.
MLA	GÜVEN BÜLENT,ÖZSAR Semin,MARAŞLI Nalan,MARAŞLI Şaban,ÖZCAN Ayla Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi. , 2003, ss.45 - 50.
AMA	GÜVEN B,ÖZSAR S,MARAŞLI N,MARAŞLI Ş,ÖZCAN A Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi. . 2003; 45 - 50.
Vancouver	GÜVEN B,ÖZSAR S,MARAŞLI N,MARAŞLI Ş,ÖZCAN A Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi. . 2003; 45 - 50.
IEEE	GÜVEN B,ÖZSAR S,MARAŞLI N,MARAŞLI Ş,ÖZCAN A "Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi." , ss.45 - 50, 2003.
ISNAD	GÜVEN, BÜLENT vd. "Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi". (2003), 45-50.

APA	GÜVEN B, ÖZSAR S, MARAŞLI N, MARAŞLI Ş, ÖZCAN A (2003). Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi. Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences, 27(1), 45 - 50.
Chicago	GÜVEN BÜLENT,ÖZSAR Semin,MARAŞLI Nalan,MARAŞLI Şaban,ÖZCAN Ayla Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi. Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences 27, no.1 (2003): 45 - 50.
MLA	GÜVEN BÜLENT,ÖZSAR Semin,MARAŞLI Nalan,MARAŞLI Şaban,ÖZCAN Ayla Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi. Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences, vol.27, no.1, 2003, ss.45 - 50.
AMA	GÜVEN B,ÖZSAR S,MARAŞLI N,MARAŞLI Ş,ÖZCAN A Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi. Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences. 2003; 27(1): 45 - 50.
Vancouver	GÜVEN B,ÖZSAR S,MARAŞLI N,MARAŞLI Ş,ÖZCAN A Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi. Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences. 2003; 27(1): 45 - 50.
IEEE	GÜVEN B,ÖZSAR S,MARAŞLI N,MARAŞLI Ş,ÖZCAN A "Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi." Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences, 27, ss.45 - 50, 2003.
ISNAD	GÜVEN, BÜLENT vd. "Testosteron için enzimmunassay tekniğinin geliştirilmesi". Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences 27/1 (2003), 45-50.