TY - JOUR TI - Kutanöz Layşmanyazise Neden Olan Olan Leishmania Türlerinin Sybr Green Bazlı ITS-1 Gerçek Zamanlı Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemiyle Tiplendirilmesi AB - Kutanöz layşmanyazis (KL) Türkiye’de en sık Şanlıurfa’da görülen önemli bir halk sağlığı sorunudur. İlimizde olduğu gibi, enfeksiyonun farklı Leishmania türleriyle oluştuğu bölgelerde tür tayini yapılması önemlidir. Çalışmamızda Şanlıurfa’dan alınan Leishmania şüpheli 136 örneğin, Sybr Green bazlı ITS-1 gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (Rt-PCR) yöntemi kullanılarak tiplendirilmesi ve daha sonra ITS-1 PCR RFLP ve direkt mikroskobik yöntemleriyle karşılaştırılması amaçlanmıştır. Layşmanyazis şüpheli hasta lezyonlarından yara sıvısı örnekleri lam üzerine alınıp, tespit edilerek Giemsa boyasıyla boyanmıştır. Preparatlar mikroskopta incelenip amastigot pozitifliği yönünden değerlendirilmiştir. Giemsa boyalı preparatlardan, QIAmp DNA Mini Kit (Qiagen, Almanya) kullanılarak DNA ekstraksiyonu yapıldıktan sonra örnekler, LITSR ve L5.8S primerleri kullanılarak Sybr Green bazlı ITS-1 Rt-PCR yöntemiyle çalışılmıştır. Çalışmada PCR sonuçlarına göre,erime eğrisi analizi yapılmış ve erime eğrileri referans suşlarla karşılaştırılmıştır. Daha sonra, yüz otuz altı örneğe ITS1 bölgesi amplifikasyonu için LITSR ve L5.8S primerleri kullanılarak PCR uygulanmıştır. Elde edilen PCR ürünleri Hae III restriksiyon enzimiyle kesilerek “restriction fragment length polymorphism (RFLP)” yapılmıştır. Ürünler metaphor agaroz jelde yürütüldükten sonra jeller 15 dakika etidyum bromür ile boyanıp, ultraviyole (UV) transilüminatörde görüntülenmiştir. Çalışmamızda Sybr Green bazlı ITS-1 Rt-PCR, ITS-1 PCR- RFLP ve direkt mikroskopi yöntemlerinin sonuçları kullanılarak karşılaştırma yapılmıştır. En yüksek pozitiflik oranı %97 (136/132) olarak ITS-1 Rt-PCR ile belirlenmiştir. ITS-1 PCR- RFLP %95.5 (136/130) ve direkt mikroskopi ile %94.1 (136/128) oranında pozitiflik saptanmıştır. Sybr Green bazlı ITS-1 Rt-PCR yöntemiyle çalışılıp pozitif bulunan 132 örneğin, erime eğrisi analiziyle 121’i Leishmania tropica, 11’i Leishmania major olarak tiplendirilmiştir. ITS-1 PCR RFLP ile çalışılan 130 örneğin 119 (%91.5)’unun L.tropica, 11 (%8.5)’inin ise L.major olduğu belirlenmiştir. Çalışmamızda kullandığımız ITS-1 Rt-PCR yöntemi en fazla pozitiflik saptayan yöntem olmuştur. Bu yöntemle Leishmania örnekleri L.tropica ve L.major olarak tiplendirilmiştir. PCR sonrası kesim, boyama gibi ekstra işlemler gerektirmemesi ve kısa sürede sonuç vermesi bakımından bu yöntemin Leishmania parazitinin varlığını tespit etmesi ve Leishmania türlerinin hızlı tanımlanmasında faydalı olabileceği ancak L.tropica ve L.major dışındaki türlerin saptanmasında etkinliğinin görülebilmesi için yeni çalışmalar yapılması gerektiği düşünülmüştür. AU - yildiz zeyrek, fadile AU - YİĞİN, AKIN AU - YENTÜR DONİ, Nebiye AU - GÜRSES, GÜLCAN DO - 10.5578/mb.20229811 PY - 2022 JO - Mikrobiyoloji Bülteni VL - 56 IS - 2 SN - 0374-9096 SP - 326 EP - 338 DB - TRDizin UR - http://search/yayin/detay/522857 ER -