Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi

Kar, Sirri; KARAER, Zafer; AKTAŞ, Metin; VATANSEVER, Zati; Güven, Esin; SUNGUR, Tolga

Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi

Tolga SUNGUR, (Gazi Üniversitesi, Fen Edebiyat Fakültesi, Biyoloji Anabilim Dalı, Ankara, Türkiye)

Sırrı KAR, (Ankara Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Parazitoloji Anabilim Dalı, Ankara, Türkiye)

Esin GÜVEN, (Ankara Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Parazitoloji Anabilim Dalı, Ankara, Türkiye)

Metin AKTAŞ, (Gazi Üniversitesi, Fen Edebiyat Fakültesi, Biyoloji Anabilim Dalı, Ankara, Türkiye)

Zafer KARAER, (Ankara Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Parazitoloji Anabilim Dalı, Ankara, Türkiye)

Zati VATANSEVER (Kafkas Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Parazitoloji Anabilim Dalı, Kars, Türkiye)

Türkiye Parazitoloji Dergisi

12 0

Yıl: 2008 Cilt: 32 Sayı: 4 Sayfa Aralığı: 305 - 308 Metin Dili: Türkçe İndeks Tarihi: 29-07-2022

Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi

Öz:

Bu çalışma, hastanelere ishal şikayeti ile başvuran 18 çocuk ve yine ishalli 27 buzağı dışkısı olmak üzere, toplam 45 örnek üzerinde yürütülmüştür. Toplanan örneklerin tümü carbol fuchsin boyama ve nested PCR yöntemleri ile Cryptosporidium spp. yönünden taranmıştır. Carbol fuchsin ile yapılan incelemelerde buzağı dışkılarının 3'ünde (%11,2), insan dışkılarının ise 1'inde (%5,6) olmak üzere, 45 örnekten toplam 4'ünde (%8,9) Cryptosporidium spp. ookistlerine rastlanmıştır. Nested PCR ile ise, buzağı dışkılarının 8'inde (%29,7), çocuk dışkılarının 1'inde (%5,6) olmak üzere toplam 9 (%20) örnekte Cryptosporidum spp spesifik amlifikasyonu gösteren bantlar elde edilmiştir. Sonuç olarak, nested PCR yöntemi ile karşılaştırmalı olarak değerlendirildiğinde, carbol fuchsin boyama yöntemi, her ne kadar tanı açısından özgül (%100) olsa da, duyarlılık açısından (%44) yetersiz kalmıştır. Yapılan çalışma, nested PCR yönteminin kuşkulu ishal olgularında, cryptosporidiosis etiyolojisisnin ortaya konması açısından, uygun bir yöntem olduğunu göstermiştir.

Anahtar Kelime: Duyarlılık ve özgüllük Kriptosporidioz İshal Polimeraz zincir reaksiyonu Dışkı Boyama ajanları Rosanilin boyalar Çocuk Cryptosporidium

Konular: Genel ve Dahili Tıp Parazitoloji

Detection of Cryptosporidium spp. in feces with nested PCR and carbol fuchsin staining method

Öz:

This study was carried out on 45 stool specimens, consisting of 18 samples from children with diarrhea and 27 samples from diarrheic calves. Samples were screened by both carbol fuchsin staining and nested PCR for presence of Cryptosporidium spp. Using the carbol fuchsin staining method, we detected a total of 4 (8.9%) positive samples out of 45; of these 3 (%11,2) were from calf samples and 1 (5.6%) from a child. Nested PCR detected a total of 9 (20.0% positive samples out of 45 including 8 (29.7%) from calf samples and 1 (5.6%) from a child. Although the staining method revealed a 100% specificity, it was deficient in sensitivity (44.0%) compared to nested PCR. The study showed that nested PCR is an acceptable method for studying the etiology of doubtful diarrheal cases.

Anahtar Kelime: Child Cryptosporidium Sensitivity and Specificity Cryptosporidiosis Diarrhea Polymerase Chain Reaction Feces Coloring Agents Rosaniline Dyes

Konular: Genel ve Dahili Tıp Parazitoloji

Belge Türü: Makale Makale Türü: Araştırma Makalesi Erişim Türü: Erişime Açık

1) Clark DP, 1999. New insights into human cryptosporidiosis. Clin Microbiol Rev, 12(4): 554-563.
2) Dubey JP, Speer CA, Fayer R, 1990. Cryptosporidiosis of man and animals. CRC Press, USA. p.199.
3) Emre Z, Aalabay M, Düzgün A, Çerçi H, 1997. Comparison of staining and concantration techniques for detection of Cryptosporidium oocysts in cattle faecal specimens. T J Vet Animal Sci, 21: 293-296.
4) Fayer R, Morgan U, Upton SJ, 2000. Epidemiology of Cryptosporidium: transmission, detection and identification. Int J Parasitol, 30: 1305-1322.
5) Heine J. 1982. Eine einfache Nachweismethode für Kryptosporidien im Kot. Zbl Vet Med B, 29: 324-327.
6) Jenkins MC, Tout J, Abrahamsen MS, Lancto CA, Higgins J, Fayer R, 2000. Estimating viability of Cryptosporidium parvum oocysts usin reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) directed at mRNA encading amyloglu-cosidase. J Microbiol Methods, 43: 97-106.
7) Kato S, Lindergard G, Mohammed HO, 2002. Utility of the Cryptosporidium oocyst wall protein (COWP) gene in a nested PCR approach for detection infection in cattle. Vet Parasitol, 2475: 1–7.
8) Leng X, Mosier DA, Oberst RD, 1996. Simplified method for recovery and PCR detection of Cryptosporidium DNA from bovine feces. Appl Env Microbiol, 62(2): 643-647.
9) Levine ND. 1985. Veterinary Protozoology. Iowa State University Press, USA. p.413.
10) Limor JR, Lal AA, Xiao L, 2002. Detection and differentiation of Cryptosporidium parasites that are pathogenic for humans by Real-Time PCR. J Clin Microbiol, 40(7): 2335-2338.
11) Lindergard G, Nydam DV, Wade SE, Schaaf SL, Mohammed HO, 2003. The sensitivity of PCR detection of Cryptosporidium oocysts in fecal samples using two DNA extraction methods. Mol Diag, 7(3-4): 147-53 [Abstract].
12) MacPherson DW, McQueen R, 1993. Cryptosporidiosis: Multiatribute evaluation of six diagnostic methods. J Clin Microbiol, 31(2): 198-202.
13) McOrist AL, Jackson M, Bird AR, 2002. A comparison of five methods for extraction of bacterial DNA from human faecal samples. J Microbiol Methods, 50: 131-139.
14) Morgan UM, Thompson RCA, 1998. PCR detection of Cryptosporidium: the way forward? Parasitol Today, 14: 469.
15) Özlem MB, Eren H, Kaya O, 1997. Aydın yöresi buzağılarında Cryptosporidium'ların varlığının araştırılması (1). Bornova Vet Kontr Araşt Enst Md Derg, 22(36): 15-22.
16) Sears CL, Kirckpatrick BD, 2001. Cryptosporidiosis and isosporiosis. In: Principles and Practice of Clinical Parasitology. John Wiley & Sons Ltd. Pres. p.139-164.
17) Starling CR, Arrowood MJ, 1993. Cryptosporidia. In: Parasitic Protozoa, Vol.6. Academic Press, 65: 159-224.
18) Wu Z, Nagano I, Boonmars T, Takahashi Y, 2004. Further evidence that genotype I and genotype II of Cryptosporidium parvum are distinct. Trop Med Health, 32(1): 5-14.
19) Xiao L, Escalante L, Yang C, Sulaiman I, Escalante AA, Montali RJ, Fayer R, Lal AA, 1999. Phylogenetic analysis of Cryptosporidium parasites based on the small-subunit rRNA gene locus. Appl Environ Microbiol, 65: 1578–1583.
20) Xiao L, Singh A, Limor J, Graczyk TK, Gradus S, Lal AA, 2001. Molecular characterization of Cryptosporidium oocysts in samples of raw surface water and wastewater. Appl Environ Microbiol, 67: 1097–1101.
21) Zerlanga DS, Trout JM, 2004. Concentrating, prufying and detecting waterborne parasites. Vet Parasitol, 126: 195-217.

APA	SUNGUR T, Kar S, Güven E, AKTAŞ M, KARAER Z, VATANSEVER Z (2008). Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi. , 305 - 308.
Chicago	SUNGUR Tolga,Kar Sirri,Güven Esin,AKTAŞ Metin,KARAER Zafer,VATANSEVER Zati Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi. (2008): 305 - 308.
MLA	SUNGUR Tolga,Kar Sirri,Güven Esin,AKTAŞ Metin,KARAER Zafer,VATANSEVER Zati Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi. , 2008, ss.305 - 308.
AMA	SUNGUR T,Kar S,Güven E,AKTAŞ M,KARAER Z,VATANSEVER Z Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi. . 2008; 305 - 308.
Vancouver	SUNGUR T,Kar S,Güven E,AKTAŞ M,KARAER Z,VATANSEVER Z Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi. . 2008; 305 - 308.
IEEE	SUNGUR T,Kar S,Güven E,AKTAŞ M,KARAER Z,VATANSEVER Z "Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi." , ss.305 - 308, 2008.
ISNAD	SUNGUR, Tolga vd. "Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi". (2008), 305-308.

APA	SUNGUR T, Kar S, Güven E, AKTAŞ M, KARAER Z, VATANSEVER Z (2008). Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi. Türkiye Parazitoloji Dergisi, 32(4), 305 - 308.
Chicago	SUNGUR Tolga,Kar Sirri,Güven Esin,AKTAŞ Metin,KARAER Zafer,VATANSEVER Zati Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi. Türkiye Parazitoloji Dergisi 32, no.4 (2008): 305 - 308.
MLA	SUNGUR Tolga,Kar Sirri,Güven Esin,AKTAŞ Metin,KARAER Zafer,VATANSEVER Zati Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi. Türkiye Parazitoloji Dergisi, vol.32, no.4, 2008, ss.305 - 308.
AMA	SUNGUR T,Kar S,Güven E,AKTAŞ M,KARAER Z,VATANSEVER Z Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi. Türkiye Parazitoloji Dergisi. 2008; 32(4): 305 - 308.
Vancouver	SUNGUR T,Kar S,Güven E,AKTAŞ M,KARAER Z,VATANSEVER Z Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi. Türkiye Parazitoloji Dergisi. 2008; 32(4): 305 - 308.
IEEE	SUNGUR T,Kar S,Güven E,AKTAŞ M,KARAER Z,VATANSEVER Z "Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi." Türkiye Parazitoloji Dergisi, 32, ss.305 - 308, 2008.
ISNAD	SUNGUR, Tolga vd. "Cryptosporidium spp'nin dışkıdan nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemi ile teşhis edilmesi". Türkiye Parazitoloji Dergisi 32/4 (2008), 305-308.