Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi

BOZDOĞAN, Bülent; Coban, Ahmet Yilmaz; Ciftci, Alper; DEMIRPEK, UGUR

Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi

Ahmet Yılmaz ÇOBAN, (Ondokuz Mayıs Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Samsun, Türkiye)

Uğur DEMİRPEK, (GATA Haydarpaşa Eğitim Hastanesi, Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Servisi, İstanbul, Türkiye)

ALPER ÇİFTCİ, (Ondokuz Mayıs Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Samsun, Türkiye)

Bülent BOZDOĞAN (Adnan Menderes Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Aydın, Türkiye)

Mikrobiyoloji Bülteni

6 0

Yıl: 2014 Cilt: 48 Sayı: 1 Sayfa Aralığı: 40 - 47 Metin Dili: Türkçe İndeks Tarihi: 29-07-2022

Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi

Öz:

Metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA), toplum ve hastane kaynaklı enfeksiyonların önemli bir nedenidir. MRSA suşlarının hızlı ve doğru olarak tanımlanması, enfeksiyonun kontrolü ve bakterinin nozokomiyal yayılımını önlemek açısından büyük önem taşımaktadır. Bu çalışmada, S.aureus izolatlarında metisilin direncinin hızlı saptanması için sınır değer duyarlılık testi olarak nitrat redüktaz testi (NRT)’nin etkinliği araştırılmıştır. Çalışmaya, kültür koleksiyonumuzdan toplam 135 S.aureus klinik izolatı dahil edilmiş; suşların in vitro metisilin duyarlılığı NRT sınır değer duyarlılık testi ve sıvı mikrodilüsyon yöntemiyle araştırılmıştır. NRT sınır değer duyarlılık testi için üç tüp kullanılmış, her bir bakteriden hazırlanan 0.5 McFarland bulanıklığındaki inokulümlerden 50’şer μl bu tüplere konulmuştur. Bu işlemden sonra tüpler 35oC’de inkübe edilmiştir. Bu tüplerden biri üreme kontrolü (ilaçsız), biri test tüpü (4 mg/L sefoksitinli) ve biri liyofilize test tüpü (4 mg/L sefoksitinli) olarak kullanılmıştır. Beş saatlik inkübasyon süresinin ardın- dan taze olarak hazırlanmış ayıraçtan [2 birim %0.2 sülfanilamid, 2 birim %0.1 N-(1-naftil) etilendiamin dihidroklorür ve 1 birim konsantre hidroklorik asit] 500’er μl kontrol tüpüne eklenmiştir. Kontrol tüpünde yeterli üremenin varlığını gösteren mor/menekşe bir rengin oluşması durumunda diğer iki tüpe de aynı miktarda ayıraç ilave edilmiştir. Diğer iki test tüpünde de mor/menekşe renk değişiminin gözlendiği durumda bakterinin sefoksitine dirençli olduğu kabul edilmiştir. Ü Üreme kontrol tüpünde renk oluşumu gözlenirken, diğer iki test tüpünde renk oluşumunun gözlenmediği durumda ise bakterinin sefoksitine (dolayısıyla metisiline) duyarlı olduğuna karar verilmiştir. Test edilen 135 izolattan mecA pozitif olan 97’si hem sıvı mikrodilüsyon yöntemi hem de NRT sınır değer duyarlılık testiyle metisiline dirençli olarak sap- tanmıştır. mecA geni negatif olan 38 izolat ise her iki yöntemle de metisiline duyarlı bulunmuştur. Buna göre NRT testinin özgüllük, duyarlılık, pozitif ve negatif prediktif değerleri %100 olarak belirlenmiştir. Sonuç olarak, tüp tabanlı NRT sınır değer duyarlılık testi birçok laboratuvar için güvenilir, tekrarlanabilir ve ucuz bir yöntemdir. Ayrıca, test sisteminin liyofilize olarak hazırlanması raf ömrünü artırmakta ve bu da laboratuvarlar için ek bir avantaj sağlamaktadır.

Anahtar Kelime:

Konular: Mikrobiyoloji Biyoteknoloji ve Uygulamalı Mikrobiyoloji

Nitrate reductase assay for the rapid detection of staphylococcus aureus methicillin resistance: A breakpoint susceptibility testing method

Öz:

Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) is an important cause of hospital- and community- acquired infections. Therefore rapid and accurate detection of MRSA is essential for infection control and prevention of nosocomial spread. In this study, the efficacy of a nitrate reductase assay (NRA) as a breakpoint susceptibility testing method was evaluated for the rapid detection of methicillin resistance in S.aureus A total of 135 S.aureus clinical isolates from our collection were tested for methicillin susceptibility by NRA breakpoint susceptibility method and by broth microdilution method. For NRA breakpoint susceptibility testing three tubes including growth control tube (without drug), test tube (with 4 mg/L cefoxitin) and lyophilized test tube (with 4 mg/L cefoxitin) were used. 50 μl of 0.5 McFarland bacte- rial suspension of each isolate was inoculated into the tubes. All tubes were incubated at 35oC. After five-hour incubation, 500 μl of freshly prepared reagent [2 units of 0.2% sulfanilamide, 2 units of 0.1% N-(1-naphthyl) ethylenediamine dihydrochloride and 1 unit of concentrated hydrochloric acid] was added into each tube and a color change was watched for. The color changed to violet/purple, if there was bacterial growth. If the color changed to violet/purple in all three tubes, the isolate was identified as methicillin-resistant. If the color changed in growth control tube but not in the test and lyophilized tube, the isolate was identified as methicillin-susceptible. Among 135 isolates tested, 97 had mecA gene and were methicillin-resistant by both microdilution and NRA breakpoint susceptibility method. The remaining 38 clinical isolates did not have this gene and were susceptible to methicillin by both methods used. All results were concordant to the PCR which was considered as the gold standard method. Specificity, sensitivity, positive and negative predictive values were 100%. NRA breakpoint susceptibility test in tubes is an inexpensive and reproducible method. This method can easily be used in many laboratories and does not require skilled personnel. In addition, test tubes are prepared by lyophilisation to provide long shelf-life which gives an important advantage.

Anahtar Kelime:

Konular: Mikrobiyoloji Biyoteknoloji ve Uygulamalı Mikrobiyoloji

Belge Türü: Makale Makale Türü: Araştırma Makalesi Erişim Türü: Bibliyografik

1. Monson LS. Staphylococci, pp: 316-9. In: Mahon CR, Lehman DC, Manuselis G (eds), Textbook of Diagnos- tic Microbiology. 2011, 4th ed. Saunders Elsevier, Missouri.
2. von Eiff C, Maas D, Sander G, Friedrich AW, Peters G, Becker K. Microbiological evaluation of a new growth- based approach for rapid detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. J Antimicrob Chemother 2008; 61(6): 1277-80.
3. Al-Talib H, Yean CY, Al-khateeb A, et al. Comparative evaluation of five culture media with triplex PCR assay for detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Curr Microbiol 2010; 61(1): 1-6.
4. Rossney AS, Herra CM, Brennan GI, Morgan PM, O’Connell B. Evaluation of the Xpert methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) assay using the GeneXpert real-time PCR platform for rapid detection of MRSA from screening specimens. J Clin Microbiol 2008; 46(10): 3285-90.
5. Gröbner S, Dion M, Plante M, Kempf VA. Evaluation of the BD GeneOhm StaphSR assay for detection of methicillin-resistant and methicillin-susceptible Staphylococcus aureus isolates from spiked positive blood culture bottles. J Clin Microbiol 2009; 47(6): 1689-94.
6. Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing. Twenty-third Informational Supplement. Document M100-S23, 2013. CLSI, Wayne PA.
7. Wolk DM, Struelens MJ, Pancholi P, et al. Rapid detection of Staphylococcus aureus and methicillin-resistant S.aureus (MRSA) in wound specimens and blood cultures: multicenter preclinical evaluation of the Cepheid Xpert MRSA/SA skin and soft tissue and blood culture assays. J Clin Microbiol 2009; 47(3): 823-6.
8. Patel PA, Ledeboer NA, Ginocchio CC, et al. Performance of the BD GeneOhm MRSA achromopeptidase assay for real-time PCR detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in nasal specimens. J Clin Microbiol 2011; 49(6): 2266-8.
9. Coban AY, Bozdogan B, Cihan CC, et al. Two new colorimetric methods for early detection of vancomycin and oxacillin resistance in Staphylococcus aureus. J Clin Microbiol 2006; 44(2): 580-2.
10. Coban AY. Rapid determination of methicillin resistance among Staphylococcus aureus clinical isolates by colorimetric methods. J Clin Microbiol 2012; 50(7): 2191-3.
11. Clinical and Laboratory Standards Institute. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically. 6th ed. Approved Standard M7-A6, 2003. CLSI, Wayne, PA.
12. McClure JA, Conly JM, Lau V, et al. Novel multiplex PCR assay for detection of the staphylococcal virulence marker Panton-Valentine leukocidin genes and simultaneous discrimination of methicillin-susceptible from -resistant staphylococci. J Clin Microbiol 2006; 44(3): 1141-4.
13. Cesur S, Yildiz E, Irmak H, et al. Evaluation of oxacillin resistance screening agar and chromogenic MRSA agar media for the detection of methicillin resistance in Staphylococcus aureus clinical isolates. Mikrobiyol Bul 2010; 44(2): 279-84.
14. Brown DF, Edwards DI, Hawkey PM, et al. Guidelines for the laboratory diagnosis and susceptibility testing of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). J Antimicrob Chemother 2005; 56(6): 1000-18.
15. Merlino J, Leroi M, Bradbury R, Veal D, Harbour C. New chromogenic identification and detection of Staph- ylococcus aureus and methicillin-resistant S.aureus. J Clin Microbiol 2000; 38(6):2378-80.
16. Lee S, Park YJ, Park KG, et al. Comparative evaluation of three chromogenic media combined with broth enrichment and the real-time PCR-based Xpert MRSA assay for screening of methicillin-resistant Staphylo- coccus aureus in nasal swabs. Ann Lab Med 2013; 33(4): 255-60.
17. Morris K, Wilson C, Wilcox MH. Evaluation of chromogenic methicillin-resistant Staphylococcus aureus me- dia: sensitivity versus turnaround time. J Hosp Infect 2012; 81(1): 20-4.
18. Coban AY, Demirpek U, Yildirim T, Cayci YT, Kocagoz T, Durupinar B. Rapid detection of methicillin resis- tance in Staphylococcus aureus isolates; evaluation of colorimetric Quicolor ES agar and determination of breakpoint inhibition zone diameters of cefoxitin. World J Microbiol Biotechnol 2011; 27(8): 1901-4.

APA	Coban A, DEMIRPEK U, Ciftci A, BOZDOĞAN B (2014). Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi. , 40 - 47.
Chicago	Coban Ahmet Yilmaz,DEMIRPEK UGUR,Ciftci Alper,BOZDOĞAN Bülent Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi. (2014): 40 - 47.
MLA	Coban Ahmet Yilmaz,DEMIRPEK UGUR,Ciftci Alper,BOZDOĞAN Bülent Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi. , 2014, ss.40 - 47.
AMA	Coban A,DEMIRPEK U,Ciftci A,BOZDOĞAN B Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi. . 2014; 40 - 47.
Vancouver	Coban A,DEMIRPEK U,Ciftci A,BOZDOĞAN B Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi. . 2014; 40 - 47.
IEEE	Coban A,DEMIRPEK U,Ciftci A,BOZDOĞAN B "Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi." , ss.40 - 47, 2014.
ISNAD	Coban, Ahmet Yilmaz vd. "Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi". (2014), 40-47.

APA	Coban A, DEMIRPEK U, Ciftci A, BOZDOĞAN B (2014). Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi. Mikrobiyoloji Bülteni, 48(1), 40 - 47.
Chicago	Coban Ahmet Yilmaz,DEMIRPEK UGUR,Ciftci Alper,BOZDOĞAN Bülent Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi. Mikrobiyoloji Bülteni 48, no.1 (2014): 40 - 47.
MLA	Coban Ahmet Yilmaz,DEMIRPEK UGUR,Ciftci Alper,BOZDOĞAN Bülent Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi. Mikrobiyoloji Bülteni, vol.48, no.1, 2014, ss.40 - 47.
AMA	Coban A,DEMIRPEK U,Ciftci A,BOZDOĞAN B Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi. Mikrobiyoloji Bülteni. 2014; 48(1): 40 - 47.
Vancouver	Coban A,DEMIRPEK U,Ciftci A,BOZDOĞAN B Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi. Mikrobiyoloji Bülteni. 2014; 48(1): 40 - 47.
IEEE	Coban A,DEMIRPEK U,Ciftci A,BOZDOĞAN B "Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi." Mikrobiyoloji Bülteni, 48, ss.40 - 47, 2014.
ISNAD	Coban, Ahmet Yilmaz vd. "Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi". Mikrobiyoloji Bülteni 48/1 (2014), 40-47.