Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması

KESKİN, Murat; Özakın, Cüneyt; ÖZBEY, Bakır Saliha

Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması

Bakır Saliha ÖZBEY, (Uludağ Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları Anabilim Dalı, Bursa, Türkiye)

Cüneyt ÖZAKIN, (Uludağ Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Bursa, Türkiye)

Murat KESKİN (Uludağ Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Gastroenteroloji Anabilim Dalı, Bursa, Türkiye)

Mikrobiyoloji Bülteni

14 0

Yıl: 2009 Cilt: 43 Sayı: 2 Sayfa Aralığı: 227 - 234 Metin Dili: Türkçe İndeks Tarihi: 29-07-2022

Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması

Öz:

Helicobacter pylori enfeksiyonu, dünyada yaygın olarak görülen kronik bakteriyel enfeksiyonlardan biri olup kronik gastrit, peptik ülser ve gastrik kanser ile ilişkilidir. H.pylori eradikasyonunda geçerli tedavi rejimi, proton pompa inhibitörü (PPI) ile amoksisilin, klaritromisin ve metronidazolü içeren iki antibakteriyel ajanın kombinasyonudur. Son yıllarda H.pylori'de antibiyotiklere karşı giderek artan direnç oranı tedavide başarısızlığa neden olmaktadır. Bu çalışmada, dispeptik yakınmaları nedeniyle Uludağ Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi, Gastroenteroloji Kliniğine başvuran 31 hastaya (yaş aralığı: 24-65 yıl; yaş ortalaması: 48.3 ± 11.3 yıl) ait gastrik biyopsi örneklerinden izole edilen H.pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları incelenmiş ve klaritromisin direncinin saptanmasında E-test (AB Biodisk, isveç) ve floresan in situ hibridizasyon (FISH; SeaFAST® Hemakim, Macaristan) yöntemleri karşılaştırılmıştır. Çalışılan 31 H.pylori izolatının klaritromisin, amoksisilin, metronidazol, tetrasiklin ve siprofloksasine karşı duyarlılığı E- test yöntemi ile çalışılmış ve direnç oranları sırasıyla %41.9, %3.2, %41.9, %3.2 ve %45.2 olarak saptanmıştır. izolatların %32.2'sinde tek antibiyotiğe karşı direnç, %45.2'sinde ise çoklu antibiyotik direnci belirlenmiştir. Hibridizasyonda, biri 16S rRNA'ya özgül ve "fluorescein" boyası ile işaretli, diğerleri 23S rRNA'daki mutasyonlara özgül ve Cy3 boyası ile işaretli problar kullanılmış; yeşil ışımanın saptanması H.pylori varlığı açısından, kırmızı ışımanın saptanması ise klaritromisine dirençli H.pylori varlığı açısından pozitif olarak değerlendirilmiştir. Sonuç olarak FISH yönteminde izolatların tamamı yeşil ışıma vermiş, E- test ile klaritromisin direnci saptanan 13 izolatın hepsinde kırmızı ışıma gözlenmiş ve klaritromisin direncini saptamada her iki yöntem arasında bir fark saptanmamıştır. Bizim çalışmamız, suş sayımızın az olmasına rağmen, bölgemizdeki H.pylori antibiyotik duyarlılık oranlarının bildirildiği öncü çalışma olup daha fazla sayıda izolatın incelendiği çok merkezli geniş araştırmalara ihtiyaç vardır.

Anahtar Kelime: İlaç direnci, bakteriyel Anti-bakteriyel ajanlar Disk difüzyon antimikrobiyal testleri Helicobacter enfeksiyonları İn situ hibridizasyon, floresan Mide Dispepsi Klaritromisin Helicobacter pylori

Konular: Gastroenteroloji ve Hepatoloji

Antibiotic resistance rates of Helicobacter pylori isolates and the comparison of E-test and fluorescent in situ hybridization methods for the detection of clarithromycin resistant strains

Öz:

Helicobacter pylori which is one of the commonly seen chronic bacterial infections in the world, has been demonstrated to have a relationship with chronic gastritis, peptic ulcer disease and gastric cancer. Current management of H.pylori infection involves the use of a proton pump inhibitor (PPI) and any two of amoxicillin, clarithromycin and metronidazole in combination. Antibiotic resistance which is in an increasing trend in H.pylori since the recent years, is the main cause of treatment failure. This study was conducted to determine the susceptibility of 31 H.pylori strains to several antibiotics by using E-test method (AB Biodisk, Sweden) and also to detect clarithromycin resistance by fluorescent in situ hybridization (FISH; SeaFAST®, Hungary). The strains were isolated from the gastric biopsy specimens of patients who were admitted to Uludağ University Hospital, Bursa, Turkey with dyspeptic complaints. Clarithromycin, amoxycillin, metronidazole, tetracycline and ciprofloxacin resistance rates were as 41.9%, 3.2%, 41.9%, 3.2% and 45.2%, respectively. Resistance to single antibiotic was detected in 32.2% of the isolates whereas multiresistance was seen in 45.2%. For the hybridization process one probe specific for 16S rRNA and labeled with a fluorescein dye and the other probe specific for the mutations in 23S rRNA and labeled with Cy3 stain were used. Green signalling denoted presence of H.pylori in the specimen and red signalling was associated with clarithromycin resistance. All of the isolates yielded green signalling and the 13 isolates found to be resistant to clarithromycin by E-test, gave red signalling. No difference was detected between the two methods in terms of clarithromycin resistance determination. This was a preliminary study reporting the H.pylori resistance rates in our region, however, further larger scale studies are required for obtaining countrywide data.

Anahtar Kelime: Dyspepsia Clarithromycin Helicobacter pylori Drug Resistance, Bacterial Anti-Bacterial Agents Disk Diffusion Antimicrobial Tests Helicobacter Infections In Situ Hybridization, Fluorescence Stomach

Konular: Gastroenteroloji ve Hepatoloji

Belge Türü: Makale Makale Türü: Araştırma Makalesi Erişim Türü: Bibliyografik

1. Dunn BE, Cohen H, Blaser MJ. Helicobacter pylori. Clin Microbiol Rev 1997; 10: 720-41.
2. Parsonnet J, Hansen S, Rodriquez L, et al. Helicobacter pylori infection and gastric lymphoma. N Engl J Med 1994; 330: 1310-1.
3. Malfertheiner P, Megraud F, O'Morain C, et al; The European Helicobacter Study Group (EHSG). Current concepts in the management of Helicobacter pylori infection: the Maastricht III Consensus Report. Gut 2007; 56: 772-81.
4. Dzieniszewski J, Jarosz M. Guidelines in the medical treatment of Helicobacter pylori infection, J Physiol Pharmacol 2006; 57: 143-54.
5. Yilmaz O, Demiray E, Tümer S, et al. Detection of Helicobacter pylori and determination of clarithromycin susceptibility using formalin-fixed, paraffin-embedded gastric biopsy specimens by fluorescence in situ hybridization. Helicobacter 2007; 12: 136-41.
6. Mishra KK, Srivastava A, Garg A, Ayyagari A. Antibiotic susceptibility of Helicobacter pylori clinical isolates: comparative evaluation of disk-diffusion and E-test methods. Curr Microbiol 2006; 53: 329-34.
7. Heep M, Kist M, Strobel S, Beck D, Lehn N. Secondary resistance among 554 isolates of Helicobacter pylori after failure of therapy. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2000; 19: 538-41.
8. Akyön Yılmaz Y. Helicobacter pylori'de antimikrobiyal ajanlara karşı direnç oluşturan mekanizmalar ve moleküler tanı yöntemleri. 3. Ulusal Moleküler ve Tanısal Mikrobiyoloji Kongresi. 28 Haziran-1 Temmuz 2004, Ankara. Program ve Bildiri Özet Kitabı, s: 42.
9. Megraud F, Lehours P. Helicobacter pylori detection and antimicrobial susceptibility testing. Clin Microbiol Rev 2007; 20: 280-322.
10. Mukhopadhyay AK, Jeong JY, Dailidiene D, Hoffmann PS, Berg DE. The fdxA ferredoxin gene can down-regulate frxA nitroreductase gene expression and is essential in many strain of Helicobacter pylori, J Bacteriol 2003; 185: 2927-35.
11. Megraud F. Epidemiology and mechanism of antibiotic resistance in Helicobacter pylori. Gastroenterology 1998; 115: 1278-82.
12. Hao Q, Li Y, Zhang ZJ, Liu Y, Gao H. New mutation points in 23S rRNA gene associated with Helicobacter pylori to claritromycin in northeast China. World J Gastroenterol 2004; 10: 1075-7.
13. Ziemniak W. Efficacy of Helicobacter pylori eradication taking into its resistance to antibiotics. J Physiol Pharmacol 2006; 57: 123-41.
14. Hu CT, Wu CC, Lin CY, et al. Resistance rate to antibiotics of Helicobacter pylori isolates in eastern Taiwan, J Gastroenterol Hepatol 2007; 22: 720-3.
15. Kantarçeken B, Yıldırım B, Karıncaoğlu M, Aladağ M, Hilmioğlu F. Helicobacter pylori and antibiotic resistance. Turk J Gastroenterol 2000; 11:1-6.
16. Ağel E, Durmaz B, Tevfik MR, Aşgın N. The isolation and antibiotic resistant pattern of Helicobacter pylori in dyspeptic patients. Turk J Med Sci 2000; 30: 143-6.
17. Haris AG, Hazell SL, Netting AG. Use of digoxigenin-labelled ampicillin in the identification of penicillin-binding proteins in Helicobacter pylori. J Antimicrob Chemother 2000; 45: 591-8.
18. Gerrits MM, Schuijffel D, van Zwet AA, Kuipers EJ, Vandenbroucke-Grauls CM, Kusters JG. Alterations in pnicillin-binding proteins 1A confer resistance to beta-lactam antibiotics in Helicobacter pylori. Antimicrob Agents Chemother 2002; 46: 2229-33.
19. Ribeiro ML, Gerrits MM, Benvengo YH, et al. Detection of high-level tetracycline resistance in clinical isolates of Helicobacter pylori using PCR-RFLP. FEMS Immunol Med Microbiol 2004; 15: 57-61.
20. Glocker E, Kist M. Rapid detection of point mutations in the gyrA gene of Helicobacter pylori conferring resistance to ciprofloxacin by a fluorescence resonance energy transfer-based real-time PCR approach, J Clin Microbiol 2004; 42: 2241-6.
21. Lascols C, Lamarque D, Costa JM, et al. Fast and accurate quantitative detection of Helicobacter pylori and identification of claritromycin resistance mutations in H.pylori isolates from gastric biopsy specimens by real-time PCR. J Clin Microbiol 2003; 41: 4573-7.
22. Trebesius K, Panthel K, Strobel S, et al. Rapid and specific detection of Helicobacter pylori macrolide resistance in gastric tissue by fluorescent in situ hybridization. Gut 2000; 46: 608-14.
23. Kolaylı F, Karadenizli A, Çelebi A, Bingöl R. Helicobacter pylori suşlarının metronidazol, klaritromisin, amoksisiline in vitro duyarlılıkları. Infeksiyon Derg 2004; 18: 473-6.
24. Bağlan PH, Bozdayı G, Özkan M, Özden A. Klaritromisin dirençli Helicobacter pylori'nin saptanmasında, E- test ve agar diliisyon metodlarinin karşılaştırılması. Akademik Gastroenteroloji Derg 2005; 4: 83-7.
25. Moosavian M, Tajbakhsh S, Samarbaf-Zadeh AR. Rapid detection of claritromycin-resistant Helicobacter pylori in patients with dyspepsia by fluorescent in situ hybridization (FISH) compared with the E-test. Ann Saudi Med 2007; 27: 84-8.
26. Rüssmann H, Kempf VA, Koletzko S, Heesemann J, Autenrieth IB. Comparison of Helicobacter pylori in situ hybridization and conventional culturing for detection of Helicobacter pylori in gastric biopsy specimens. J Clin Microbiol 2001; 39: 304-8.

APA	ÖZBEY B, Özakın C, KESKİN M (2009). Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması. , 227 - 234.
Chicago	ÖZBEY Bakır Saliha,Özakın Cüneyt,KESKİN Murat Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması. (2009): 227 - 234.
MLA	ÖZBEY Bakır Saliha,Özakın Cüneyt,KESKİN Murat Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması. , 2009, ss.227 - 234.
AMA	ÖZBEY B,Özakın C,KESKİN M Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması. . 2009; 227 - 234.
Vancouver	ÖZBEY B,Özakın C,KESKİN M Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması. . 2009; 227 - 234.
IEEE	ÖZBEY B,Özakın C,KESKİN M "Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması." , ss.227 - 234, 2009.
ISNAD	ÖZBEY, Bakır Saliha vd. "Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması". (2009), 227-234.

APA	ÖZBEY B, Özakın C, KESKİN M (2009). Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni, 43(2), 227 - 234.
Chicago	ÖZBEY Bakır Saliha,Özakın Cüneyt,KESKİN Murat Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni 43, no.2 (2009): 227 - 234.
MLA	ÖZBEY Bakır Saliha,Özakın Cüneyt,KESKİN Murat Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni, vol.43, no.2, 2009, ss.227 - 234.
AMA	ÖZBEY B,Özakın C,KESKİN M Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni. 2009; 43(2): 227 - 234.
Vancouver	ÖZBEY B,Özakın C,KESKİN M Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni. 2009; 43(2): 227 - 234.
IEEE	ÖZBEY B,Özakın C,KESKİN M "Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması." Mikrobiyoloji Bülteni, 43, ss.227 - 234, 2009.
ISNAD	ÖZBEY, Bakır Saliha vd. "Helicobacter pylori izolatlarının antibiyotik direnç oranları ve klaritromisine dirençli suşların saptanmasında E-test ve floresan in situ hibridizasyon yöntemlerinin karşılaştırılması". Mikrobiyoloji Bülteni 43/2 (2009), 227-234.