Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı

DAĞCI, HANDE; ALKAN, M. Ziya; AKARCA, Ulus Salih; DİRİM ERDOĞAN, DERYA; TURGAY, NEVIN

Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı

DERYA DİRİM ERDOĞAN, (Ege Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Parazitoloji Anabilim Dalı, İzmir, Türkiye)

Hande DAĞCI, (Ege Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Parazitoloji Anabilim Dalı, İzmir, Türkiye)

Nevin TURGAY, (Ege Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Parazitoloji Anabilim Dalı, İzmir, Türkiye)

Ulus Salih AKARCA, (Ege Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Gastroenteroloji Anabilim Dalı, İzmir, Türkiye)

M. Ziya ALKAN (Ege Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Parazitoloji Anabilim Dalı, İzmir, Türkiye)

Türkiye Parazitoloji Dergisi

6 0

Yıl: 2009 Cilt: 33 Sayı: 2 Sayfa Aralığı: 120 - 124 Metin Dili: Türkçe İndeks Tarihi: 29-07-2022

Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı

Öz:

İnsanlarda diyareye neden olabilen cryptosporidiosisin tanısında genellikle asit-fast boyama tekniği kullanılmaktadır. Ancak bu yöntemle bazı Cryptosporidium spp. ookistleri boyanmayıp “hayalet benzeri” yapılar oluşturmakta ve değerlendirme deneyimli uzmanlarca yapılabilmektedir. Son yıllarda tanı ve genotiplendirmede yaygın olarak kullanılan PCR tekniği, yüksek sensitivitesiyle geleneksel yöntemlere alternatif oluşturmaktadır. Cryptosporidiosis tanısında taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde PCR yönteminin etkinliğini araştırmak amacıyla, Ağustos 2001-Ağustos 2003 tarihleri arasında Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi Parazitoloji Polikliniğine başvuran ve dışkı incelemeleri sonucunda Cryptosporidium spp. ookistleri saptanan 22 hastaya ait toplam 33 dışkı örneği çalışmaya alınmıştır. 23'ü taze, 10 tanesi ise %10 formaldehit içinde saklanmış olan bu dışkı örneklerine nested-PCR yöntemi uygulanmıştır. Kontrol grubu olarak, 8'i farklı parazitler içeren, 3'ü parazitolojik açıdan negatif olan toplam 11 dışkı örneği alınmıştır. Uygulanan nested-PCR yönteminin taze dışkılarda sensitivite ve spesifitesi %100, formaldehitli dışkılardaki sensitivitesi ise %50 olarak saptanmıştır. Çalışmamızda, cryptosporidiosisin moleküler tanısında saptanan yüksek sensitivite nedeniyle taze dışkı örneklerinin tercih edilmesi gerektiği ve özellikle az sayıda ookist içeren dışkılarda PCR'ın, asit-fast boyama yöntemine alternatif bir tanı yöntemi olarak kullanılabileceği sonucuna varılmıştır.

Anahtar Kelime: Kriptosporidioz Tanı Polimeraz zincir reaksiyonu Formaldehit Dışkı DNA, Protozoan Cryptosporidium

Konular: Biyoloji Mikrobiyoloji Parazitoloji

The molecular diagnosis of cryptosporidiosis in fresh and formalin preserved fecal samples

Öz:

The acid-fast staining method is widely used in the diagnosis of cryptosporidiosis, a disease causing diarrhea in humans. However in this technique, some of Cryptosporidium spp oocysts can not be stained and seen as formed “ghost-like bodies” and which can only be evaluated by experienced microscopists. In the recent years, PCR technique which is proven to be also highly sensitive in diagnosis and genotyping, is used as an alternative method. In our study we aimed to evaluate the efficacy of PCR in diagnosis of cryptosporodiosis. Thirty-three stool samples, belonging to 22 patients who applied to Ege University Hospital, Parasitology Clinic between August 2001 – August 2003 and microscopically diagnosed as cryptosporodiosis has been included in the study. Twenty-three of these 33 samples were processed immediately, while ten samples were stored in 10% formalin. As the control group, 11 stool samples including 8 specimens with different parasites and 3 negative samples were selected. Nested-PCR is applied to all samples. The sensitivity and specifity of the method for fresh and formalin preserved samples were found to be 100% and 50%, respectively. As a conclusion, PCR technique is found to be useful for diagnosis in cryptosporodiosis patients with especially those including few oocysts in their fresh feces.

Anahtar Kelime: DNA, Protozoan Cryptosporidium Cryptosporidiosis Diagnosis Polymerase Chain Reaction Formaldehyde Feces

Konular: Biyoloji Mikrobiyoloji Parazitoloji

Belge Türü: Makale Makale Türü: Araştırma Makalesi Erişim Türü: Erişime Açık

1) Arrowood MJ, 1997. Diagnosis. Fayer R. Ed. Cryptosporidium and Cryptosporidiosis. US: CRC Pres. p. 43-64.
2) Bogaerts J, Lepage P, Rouvroy D, Vandepitte J, 1984. Cryptosporidium spp., A Frequent Cause of Diarrhea in Central Africa. J Clin Microbiol, 20 (5): 874-876.
3) Clark DP, 1999. New Insights into Human Cryptosporidiosis. Clin Microbiol Rev, 12 (4): 554 -563.
4) El-Shazly AM, Gabr A, Mahmoud MSL, Aziz SSA, Saleh WA, 2002. The Use of Ziehl-Neelsen Stain, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay and Nested Polymerase Chain Reaction in Diagnosis of Cryptosporidiosis in Immunocompetent, Compromised Patients. J Egypt Soc Parasitol, 32(1): 155-166.
5) Entrala E, Rueda-Rubio M, Janssen D, Mascaro C, 1995. Influence of Hydrogen Peroxide on Acid-fast Stainig of Cryptosporidium parvum Oocysts. Int Journal Parasitology, 25 (12): 1473-1477.
6) Fayer R, Morgan U, Upton SJ, 2000. Epidemiology of Cryptosporidium: transmission, detection and identification. Int Journal Parasitology, 30: 1305-1322.
7) Garcia LS, Bruckner DA, 1993. Macroscopic and Microscopic Examination of Fecal Specimens. Diagnostic Medical Parasitology. Second Edition. Washington DC: American Society for Microbiology, p.501-540.
8) Garcia LS, Bruckner DA, 1993. Intestinal Protozoa: Coccidia and Microsporidia. Diagnostic Medical Parasitology, Second Edition. Washington DC: American Society for Microbiology, p. 49-74.
9) Kaushik K, Khurana S, Wanchu A, Malla N, 2008. Evaluation of staining techniques, antigen detection and nested PCR for the diagnosis of cryptosporidiosis in HIV seropositive and seronegative patients. Acta Trop, 107:1-7.
10) Kostrzynska M, Sankey M, Haack E, Power C, Aldom JE, Chagla AH, Unger S, Palmateer G, Lee H, Trevors JT, De Grandis SA, 1999. Three Sample Preparation Protocols for Polymerase Chain Reaction Based Detection of Cryptosporidium parvum in Environmental Samples. J Microbiol Methods, 35: 65-71.
11) Leav BA, Mackay M, Ward HD, 2003. Cryptosporidium Species: New Insights and Old Challenges. Clin Infect Dis, 36: 903-908.
12) McLauchlin J, Pedraza-Díaz S, Amar-Hoetzeneder C, Nichols GL, 1999. Genetic Characterization of Cryptosporidium Strains from 218 Patients with Diarrhea Diagnosed as Having Sporadic Cryptosporidiosis. J Clin Microbiol, 37(10): 3153-3158.
13) Morgan UM, Thompson RCA, 1998. PCR Detection of Cryptosporidium: The Way Forward? Parasitol Today, 14(6): 241-245.
14) Pedraza-Dίaz S, Amar C, Nichols GL, McLauchlin J, 2001. Nested Polymerase Chain Reaction for Amplification of the Cryptosporidium Oocyst Wall Protein Gene. Emerg Infect Dis, 7(1): 49-56.
15) Sungur T, Kar S, Güven E, Aktaş M, Karaer Z, Vatansever Z, 2008. Cryptosporidium spp'nin Dışkıdan Nested PCR ve Carbol Fuchsin Boyama Yöntemi İle Teşhis Edilmesi. Türkiye Parazitol Derg, 32(4):305-308.
16) Ungar BLP, 1995. Cryptosporidium. Mandell GL, Bennett JE, Dolin R. eds. Mandell, Douglas and Bennett's Principles and Practice of Infectious Diseases. Forth Edition. US: Churchill Livingstone, p.2500-2510.
17) Ward LA, Wang Y, 2001. Rapid Methods to Isolate Cryptosporidium DNA from Frozen Feces for PCR. Diag Microbiol Infect Dis, 41: 37-42.

APA	DİRİM ERDOĞAN D, DAĞCI H, TURGAY N, AKARCA U, ALKAN M (2009). Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı. , 120 - 124.
Chicago	DİRİM ERDOĞAN DERYA,DAĞCI HANDE,TURGAY NEVIN,AKARCA Ulus Salih,ALKAN M. Ziya Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı. (2009): 120 - 124.
MLA	DİRİM ERDOĞAN DERYA,DAĞCI HANDE,TURGAY NEVIN,AKARCA Ulus Salih,ALKAN M. Ziya Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı. , 2009, ss.120 - 124.
AMA	DİRİM ERDOĞAN D,DAĞCI H,TURGAY N,AKARCA U,ALKAN M Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı. . 2009; 120 - 124.
Vancouver	DİRİM ERDOĞAN D,DAĞCI H,TURGAY N,AKARCA U,ALKAN M Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı. . 2009; 120 - 124.
IEEE	DİRİM ERDOĞAN D,DAĞCI H,TURGAY N,AKARCA U,ALKAN M "Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı." , ss.120 - 124, 2009.
ISNAD	DİRİM ERDOĞAN, DERYA vd. "Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı". (2009), 120-124.

APA	DİRİM ERDOĞAN D, DAĞCI H, TURGAY N, AKARCA U, ALKAN M (2009). Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı. Türkiye Parazitoloji Dergisi, 33(2), 120 - 124.
Chicago	DİRİM ERDOĞAN DERYA,DAĞCI HANDE,TURGAY NEVIN,AKARCA Ulus Salih,ALKAN M. Ziya Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı. Türkiye Parazitoloji Dergisi 33, no.2 (2009): 120 - 124.
MLA	DİRİM ERDOĞAN DERYA,DAĞCI HANDE,TURGAY NEVIN,AKARCA Ulus Salih,ALKAN M. Ziya Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı. Türkiye Parazitoloji Dergisi, vol.33, no.2, 2009, ss.120 - 124.
AMA	DİRİM ERDOĞAN D,DAĞCI H,TURGAY N,AKARCA U,ALKAN M Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı. Türkiye Parazitoloji Dergisi. 2009; 33(2): 120 - 124.
Vancouver	DİRİM ERDOĞAN D,DAĞCI H,TURGAY N,AKARCA U,ALKAN M Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı. Türkiye Parazitoloji Dergisi. 2009; 33(2): 120 - 124.
IEEE	DİRİM ERDOĞAN D,DAĞCI H,TURGAY N,AKARCA U,ALKAN M "Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı." Türkiye Parazitoloji Dergisi, 33, ss.120 - 124, 2009.
ISNAD	DİRİM ERDOĞAN, DERYA vd. "Taze ve formaldehitle saklanmış dışkı örneklerinde cryptosporidiosisin moleküler tanısı". Türkiye Parazitoloji Dergisi 33/2 (2009), 120-124.